疫苗凍干保護(hù)劑、凍干水痘減毒活疫苗及其制備方法，屬于疫苗生產(chǎn)制備工藝領(lǐng)域，解決了現(xiàn)有水痘疫苗凍干保護(hù)劑含有明膠，或者雖然去除了明膠但是含有右旋糖酐且有的仍含有人血白蛋白，從而使疫苗的用藥安全仍存在潛在隱患的問(wèn)題。該疫苗凍干保護(hù)劑含有海藻糖、谷氨酸鈉、尿素、L-精氨酸、199培養(yǎng)基，不含有明膠、右旋糖酐、人血白蛋白等大分子過(guò)敏原性成分，細(xì)菌內(nèi)毒素含量低；采用上述保護(hù)劑制備的水痘疫苗，內(nèi)毒素含量及牛血清白蛋白和抗生素殘留量低且穩(wěn)定性良好，安全有效，要點(diǎn)是細(xì)胞傳代后直接感染，感染后次日進(jìn)行洗換并換以無(wú)血清維持液，操作簡(jiǎn)單成本低，有利于細(xì)胞病變的整齊均勻形成并能夠大幅度降低牛血清白蛋白殘留量。

1.疫苗凍干保護(hù)劑，其特征在于，該保護(hù)劑中各成分及其終濃度為：海藻
糖50～100g/l、谷氨酸鈉5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培養(yǎng)基
9.9g/l，該保護(hù)劑中不含有明膠、人血白蛋白和右旋糖酐。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗凍干保護(hù)劑，其特征在于，該保護(hù)劑通過(guò)以
下方法制備：按照海藻糖50～100g/l、谷氨酸鈉5～15g/l、尿素2～8g/l、L-
精氨酸2g/l、199培養(yǎng)基9.9g/l的比例稱取各物質(zhì)，充分溶解于適量滅菌注射用
水后，定容，采用1N鹽酸調(diào)節(jié)PH值至7.2～7.4，除菌過(guò)濾，即得；置于2～
8℃條件保存?zhèn)溆茫行?2個(gè)月。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述海藻糖的終
濃度為75g/l。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述谷氨酸鈉的
終濃度為10g/l。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述尿素的終濃
度為5g/l。
6.凍干水痘減毒活疫苗，其特征在于，它是由凍干水痘減毒活疫苗原液、
權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的疫苗凍干保護(hù)劑制備而成。
7.制備權(quán)利要求6所述的凍干水痘減毒活疫苗的方法，其特征在于，該方
法包括以下步驟：
(1)毒種采用Oka株水痘病毒，培養(yǎng)基質(zhì)采用2BS株人胚肺二倍體細(xì)胞；
(2)采用2BS細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)2BS株人胚肺二倍體細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)傳代，培
養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)擴(kuò)增至不超過(guò)41代；所述2BS細(xì)胞培養(yǎng)液為PH值7.2～7.3、
含12～18％小牛血清的MEM生長(zhǎng)液；
(3)直接感染法：待2BS株人胚肺二倍體細(xì)胞生長(zhǎng)至豐滿單層后，在原
2BS細(xì)胞培養(yǎng)液中按0.05～0.1MOI直接加入Oka株水痘病毒感染2BS株人胚
肺二倍體細(xì)胞，同時(shí)加入碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7.2～7.3，置于36℃培養(yǎng)；
(4)感染后24小時(shí)，傾去2BS細(xì)胞培養(yǎng)液，用相當(dāng)于二倍以上2BS細(xì)胞
培養(yǎng)液的Hank's液洗滌2BS株人胚肺二倍體細(xì)胞表面，以去除牛血清，并換以
不含有任何血清成分的無(wú)血清MEM維持液，置于36℃繼續(xù)培養(yǎng)；
(5)當(dāng)2BS株人胚肺二倍體細(xì)胞病變程度達(dá)到+++以上時(shí)，傾去無(wú)血清
MEM維持液，采用0.03～0.05％的EDTA溶液消化2BS株人胚肺二倍體細(xì)胞，
在2～8℃下以3000rpm的轉(zhuǎn)速離心8～10分鐘，棄上清液，保留沉淀物，向沉
淀物中加入疫苗凍干保護(hù)劑重懸，收集含有水痘病毒的細(xì)胞，抽樣做無(wú)菌檢查
后，置于-70℃保存；
(6)將步驟(5)經(jīng)無(wú)菌檢查合格的含有水痘病毒的細(xì)胞懸液合并，在2～
8℃下以30KHZ的超聲波頻率進(jìn)行連續(xù)流超聲破碎，流速控制在1000～1500ml
/min，經(jīng)澄清過(guò)濾后得凍干水痘減毒活疫苗原液，抽樣做原液檢定后，置于-70
℃保存；
(7)凍干水痘減毒活疫苗原液檢定合格后，根據(jù)病毒滴度加入與步驟(5)
中相同的疫苗凍干保護(hù)劑進(jìn)行適度的稀釋，成為疫苗半成品，并立即分裝凍干，
即制成凍干水痘減毒活疫苗；
步驟(5)和步驟(7)中，所述疫苗凍干保護(hù)劑的各成分及其終濃度為：
海藻糖50～100g/l、谷氨酸鈉5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培
養(yǎng)基9.9g/l，該保護(hù)劑中不含有明膠、人血白蛋白和右旋糖酐。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備凍干水痘減毒活疫苗的方法，其特征在于，
步驟(4)中，所述不含有任何血清成分的無(wú)血清MEM維持液中各成分及其終
濃度為：谷氨酰胺0.3g/l、碳酸氫鈉2.4～3.2g/l、MEM培養(yǎng)基9.4g/l；按照比
例稱取以上物質(zhì)，充分溶解于適量滅菌注射用水后，定容，除菌過(guò)濾，即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備凍干水痘減毒活疫苗的方法，其特征在于，
步驟(7)中，所述凍干采用低溫真空冷凍干燥法，半成品分裝、裝箱結(jié)束后，
冷凍干燥箱預(yù)冷凍至-45～-50℃，使制品溫度達(dá)到-40℃以下保持至少2個(gè)小時(shí)，
開(kāi)啟真空第一階段干燥即升華干燥，真空控制設(shè)定為5Pa±1Pa，導(dǎo)熱油溫度先
設(shè)定為-15℃，維持8個(gè)小時(shí)，之后導(dǎo)熱油溫度設(shè)定為-10℃，維持5個(gè)小時(shí)，當(dāng)
產(chǎn)品溫度上升到導(dǎo)熱油出口溫度且凍干箱和凝結(jié)器的壓力接近并維持不變時(shí)，
在此基礎(chǔ)上再維持1小時(shí)，以徹底去除制品中的冰晶，之后進(jìn)入第二階段干燥
即解析干燥，導(dǎo)熱油初始溫度設(shè)定為45℃，制品溫度控制在32～35℃，維持10
個(gè)小時(shí)后凍干結(jié)束，即制成凍干水痘減毒活疫苗。