本發(fā)明提供一種用于微生物法定量檢測葉酸的微孔板，其由如下步驟制備而成：活化后的鼠李糖乳桿菌接種處理，然后加入海藻糖/蔗糖和氯化鈣混合液制成測試菌液；再將所述測試菌液添加至微孔板各孔中，在低真空環(huán)境下加熱測試菌液，最后干燥處理。本發(fā)明還提供了包含該微孔板的試劑盒及其制備方法。本發(fā)明通過在制備中加入海藻糖/蔗糖和氯化鈣混合液保護(hù)劑，以及改進(jìn)菌液的干燥方法，降低了試劑盒中的菌種損失，提高了葉酸檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。經(jīng)活菌計(jì)數(shù)，上述方法制備的微孔板中的鼠李糖乳桿菌干燥泡沫中保存的活性菌種數(shù)，均超過了所添加菌液中菌種總數(shù)的93％(普通冷凍干燥法至少損失約20％的菌種)。

1.一種制備用于微生物法定量檢測葉酸的微孔板的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：1)活化鼠李糖乳桿菌，將活化后的鼠李糖乳桿菌菌株接種到乳桿菌肉湯培養(yǎng)基中，35-39℃培養(yǎng)20-24h，2000轉(zhuǎn)/min離心2-3min，棄去上清液；2)加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻后離心2-3min，棄去上清液，重復(fù)前述操作一次，然后再加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻，制得菌懸液；吸1-2ml菌懸液至9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液中，混勻制成測試菌液；3)將所述測試菌液2-8μl添加至微孔板各孔中，分別在24-26mTorr、49-51mTorr、495-505mTorr、4-6Torr、49-51Torr、195-205Torr的低真空環(huán)境下加熱測試菌液，使測試菌液在29-31℃的溫度條件下沸騰而產(chǎn)生泡沫，并在所述低真空環(huán)境和室溫下蒸發(fā)干燥24-48h，其中，所述鼠李糖乳桿菌菌株為鼠李糖乳桿菌ATCC7469，并且步驟2)中蔗糖和氯化鈣混合液中，各自的濃度分別為195-205mM、9-11mM。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中的活化鼠李糖乳桿菌采用活化方式為：將10g脫脂奶粉加入90ml蒸餾水中，混勻，115℃滅菌15分鐘，即為液體培養(yǎng)基；將0.2-0.3g粉末鼠李糖乳桿菌菌株加入10ml所述液體培養(yǎng)基中，36-38℃培養(yǎng)直至凝乳，得凝乳狀菌種，放置于0-4℃保存；將0.2-0.3ml上步驟中培養(yǎng)好的凝乳狀菌種加入10ml所述液體培養(yǎng)基中，36-38℃培養(yǎng)直至凝乳；重復(fù)幾次上一步驟，不同的是每次使用的菌種均是上一步驟獲得的培養(yǎng)物，待凝乳時(shí)間穩(wěn)定后表明菌種已活化好。3.一種由權(quán)利要求1或2所述的方法制備的微孔板。4.一種包含權(quán)利要求3所述的微孔板的試劑盒。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其還包含葉酸標(biāo)準(zhǔn)品、葉酸測試培養(yǎng)基以及無菌水。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于，所述葉酸測試培養(yǎng)基為10.0g/L活性碳處理的胰腺消化酪蛋白、40.0g/L葡萄糖、40.0g/L醋酸鈉、1.0g/L磷酸二氫鉀、1.0g/L磷酸氫二鉀、0.6g/L L-天冬氨酸、0.5g/L L-鹽酸半胱氨酸、0.2g/L無水硫酸鎂、0.2g/L DL-色氨酸、0.1g/L聚山梨醇酯-80、20.0mg/L黃嘌呤、20mg/L氯化鈉、20.0mg/L硫酸亞鐵、15.0mg/L硫酸錳、10.0mg/L硫酸腺嘌呤、10.0mg/L鹽酸鳥嘌呤、10.0mg/L尿嘧啶、5.0mg/L還原型谷胱甘肽、2.0mg/L對氨基苯甲酸、1.0mg/L核黃素、800μg/L泛酸鈣、800μg/L煙酸、400μg/L鹽酸硫胺素、20μg/L生物素。7.一種制備權(quán)利要求4-6中任意一項(xiàng)所述的試劑盒的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：先制備包被有鼠李糖乳桿菌菌株的微孔板：1)活化鼠李糖乳桿菌，將活化后的鼠李糖乳桿菌菌株接種到乳桿菌肉湯培養(yǎng)基中，35-39℃培養(yǎng)20-24h，2000轉(zhuǎn)/min離心2-3min，棄去上清液；2)加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻后離心2-3min，棄去上清液，重復(fù)前述操作一次，然后再加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻，制得菌懸液；吸1-2ml菌懸液至9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液中，混勻制成測試菌液；3)將所述測試菌液2-8μl添加至微孔板各孔中，分別在24-26mTorr、49-51mTorr、495-505mTorr、4-6Torr、49-51Torr、195-205Torr的低真空環(huán)境下加熱測試菌液，使測試菌液在29-31℃的溫度條件下沸騰而產(chǎn)生泡沫，并在所述低真空環(huán)境和室溫下蒸發(fā)干燥24-48h，從而制得定量檢測葉酸用微孔板，其中，所述鼠李糖乳桿菌菌株為鼠李糖乳桿菌ATCC7469，并且步驟2)中蔗糖和氯化鈣混合液中，各自的濃度分別為195-205mM、9-11mM；然后制備葉酸標(biāo)準(zhǔn)品及葉酸測試培養(yǎng)基。