本發明提供了一種肺癌功能性高通量用藥篩選的方法，與以往方法不同，可為癌癥患者提供精準個體化治療選藥。本發明通過控制腫瘤細胞培養液中慶大霉素和霍亂霉素的濃度，可以提高腫瘤細胞的成活率，有效維持細胞形態促進腫瘤細胞對營養物質的吸收。通過控制腫瘤細胞培養液中胰島素與所述的EGF的濃度，可以提高腫瘤細胞的生長速率，并提高細胞活性，可以得到大量的高活性腫瘤細胞，同時使用該比例的胰島素和生長因子可以降低胎牛血清的使用量，由于胎牛血清價格比較昂貴，使用量減少有利于節約資源，并且使用本發明培養的細胞用于藥物篩選測定的用藥的半數抑制濃度(IC50)誤差小，可以減少檢測次數。

1.一種肺癌功能性高通量用藥篩選的方法，其特征在于：包括如下步驟：
（1）肺癌細胞的獲取：從新鮮手術或者穿刺標本獲取肺癌腫瘤組織，消化腫瘤組織，分
離得到分散的肺癌細胞；
（2）肺癌細胞的擴增培養：對步驟（1）中得到的肺癌細胞在實驗室進行保真擴增培養，
生成微小腫瘤，即得到肺癌重編程類器官；
（3）肺癌細胞的貼壁培養：將步驟（2）中得到的肺癌重編程類器官分散，貼壁培養得到
貼壁細胞；
（4）藥物篩選：將步驟（3）中制備的貼壁細胞進行候選藥物處理，并檢測細胞生存率，進
行藥物篩選；
步驟（2）中所述的擴增培養是：將步驟（1）中得到的分散腫瘤細胞置于腫瘤細胞培養液
中在37℃的CO₂孵箱中進行培養，培養2-3周得到腫瘤細胞株；
所述的腫瘤細胞培養液為每500mL含有以下成分：
完全DMEM 含6-10%的胎牛血清 373mL；
F12培養基 125mL；
胰島素 5-10μg/mL；
兩性霉素B 250-300ng/mL；
慶大霉素 10-15μg/mL；
霍亂毒素 0.1-0.5nM；
EGF 0.125-0.25ng/mL；
氫化可的松 25-30ng/mL；
ROCK抑制劑Y-27632 10-15μmol/L；
步驟（3）中所述的貼壁培養是：將步驟（2）中得到的肺癌重編程類器官用消化酶進行消
化，然后用腫瘤選擇性培養液稀釋后過夜培養；所述消化酶為0.05%胰酶-EDTA；
所述的腫瘤選擇性培養液為每500mL含有以下成分：
RPMI 1640培養基 含2-5%胎牛血清 485mL；
慶大霉素 10-15μg/mL；
氫化可的松 10-15nM；
胰島素 5-10μg/mL；
轉鐵蛋白 100-150μg/mL；
17 beta-雌二醇 10-15nM；
亞硒酸鈉 30-40nM。
2.根據權利要求1所述的肺癌功能性高通量用藥篩選的方法，其特征在于：步驟（1）中
所述的消化是：用消化酶消化，然后用為肺癌腫瘤組織4倍體積的含10%小牛血清的DMEM細
胞培養液中止消化，收集消化液。
3.根據權利要求2所述的肺癌功能性高通量用藥篩選的方法，其特征在于：所述消化酶
由225單位/mL的膠原酶或透明質酸酶和13單位/mL的分散酶組成。
4.根據權利要求1所述的肺癌功能性高通量用藥篩選的方法，其特征在于：所述的兩性
霉素B和氫化可的松的濃度比為9-12：1。
5.根據權利要求1所述的肺癌功能性高通量用藥篩選的方法，其特征在于：所述的選擇
性腫瘤細胞培養液中所述的胰島素與轉鐵蛋白的濃度比為1：10-30。
6.根據權利要求1-5任一項所述的肺癌功能性高通量用藥篩選的方法，其特征在于：具
體操作步驟為：
（1）肺癌細胞的獲取：將獲得的肺癌細胞在無菌條件下去掉其脂肪組織，用消化酶消
化，所述消化酶由225單位/mL的膠原酶或透明質酸酶和13單位/mL的分散酶組成，然后用為
肺癌腫瘤組織4倍體積的含10%小牛血清的DMEM細胞培養液中止消化，收集消化液，離心后
收集沉淀，得到分散的肺癌細胞；
（2）肺癌細胞的擴增培養：用腫瘤細胞培養液將步驟（1）中獲得的分散的肺癌細胞重懸
沉淀在實驗室進行保真擴增培養，放置于培養瓶并放置于37℃的CO₂孵箱中進行培養，培養
2-3周得到微小腫瘤，即得到肺癌重編程類器官；
（3）肺癌細胞的貼壁培養：將步驟（2）中培養得到的肺癌重編程類器官用0.05%胰酶-
EDTA進行消化，并用自動細胞計數儀進行計數，接種384孔板，然后用腫瘤選擇性培養液稀
釋，貼壁培養過夜，即得貼壁的肺癌細胞；
（4）藥物篩選：將步驟（3）中得到的貼壁的肺癌細胞用各種傳統化療藥物，靶向藥物或
幾種藥物組合等候選藥物處理72小時后，用ATP化學發光法檢測細胞生存率，進行藥物篩
選。