本發明涉及一種產膽鹽水解酶乳酸菌干粉發酵劑的制備方法，適用于功能性酸奶及益生菌制劑等發酵乳制品干粉發酵劑的生產。本發明利用篩選自藏靈菇的干酪乳桿菌KL1、乳酸乳球菌乳亞種KS4和嗜熱鏈球菌Tx三株產膽鹽水解酶的菌種，經過活化和擴大培養，利用自動發酵罐進行高密度培養，再經離心濃縮和加入凍干保護劑，預凍和凍干，制備產膽鹽水解酶乳酸菌干粉發酵劑。本發明優化高密度培養、預凍和凍干條件，使菌種存活率達到70％以上，且干粉發酵劑活菌數可達10cfu/g以上。本發明制備的干粉發酵劑發酵牛奶后，所得酸奶口感黏稠細膩幼滑，甜酸度適中，有濃郁的酯香風味。

1.一種利用菌株KL1CGMCC?No.1809為干酪乳桿菌(Lactobacillus?casei)，
菌株KS4CGMCC?No.1807為乳酸乳球菌乳亞種(Lactococcus?lactis?subsp.lacti)，
菌株Tx?CGMCC?No.1810為嗜熱鏈球菌(Streptococcus?thermophilus)三種產膽鹽
水解酶乳酸菌制備干粉發酵劑的方法，其特征在于：將菌株KL1、KS4和Tx分別
于接種量2％(V/V)，培養溫度37℃，培養時間12h的條件下進行活化，得到活化
菌種；將活化菌種于接種量3％，培養溫度37℃，培養時間12h的條件下分別進行
擴大培養，得到擴大培養液；將KL1、KS4和Tx菌株的擴大培養液按3∶1∶2的比例
接種于蒙牛純牛奶中，總接種量為4％，并按純牛奶體積5％的量加入新鮮胡蘿卜
原汁作為生長因子，利用5L自動發酵罐進行滅菌和高密度培養，培養溫度40℃，
培養液pH6.5，攪拌轉速50r/min，培養時間6h，得到液體發酵劑；將液體發酵劑
于4℃、8000r/min離心10min，棄掉上清液，收集得到菌泥；按離心前發酵劑1/10
體積的量，取滅菌牛奶作為凍干基質，分裝于600mL的凍干瓶中，將離心收集后
的菌泥置于凍干基質中，加入2.5％甘油(V/V)、2.5％谷氨酸鈉(W/V)和2.5％脫脂
奶粉(W/V)的凍干保護劑，混合均勻后，得到濃縮發酵劑；將每個凍干瓶裝量
為100mL的濃縮發酵劑于-30℃預凍13h至凍結狀態，得到預凍發酵劑；利用美國
產6L?LABCONCO真空冷凍干燥機將預凍發酵劑于凍干溫度-55℃、真空度
0.16mBar條件下，凍干48h至完全干燥狀態，得到產膽鹽水解酶乳酸菌干粉發酵
劑。