本發(fā)明涉及利用所選微生物菌株實(shí)現(xiàn)的用于制備類秋水仙堿化合物的3-O-糖基衍生物的生物轉(zhuǎn)化方法。

1.制備式(I)的3-O-糖基類秋水仙堿化合物的方法，

其中R₁是O-糖苷殘基，R₂是氫或C₁-C₇酰基，R₃是C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆
硫烷基，所述方法包括利用巨大芽孢桿菌(Bacillus?megaterium)對其中R₁
是甲氧基的式(I)化合物進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，所述方法包括將與氮和碳源組合的
其中R₁是甲氧基的式(I)化合物多次分份加料到含有脫甲基化的類秋水仙
堿的預(yù)先的種子培養(yǎng)物中，所述脫甲基化的類秋水仙堿用于誘導(dǎo)糖基化酶
體系，其中脫甲基化的類秋水仙堿選自3-O-脫甲基秋水仙堿或3-O-脫甲基
硫代秋水仙堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中脫甲基化的類秋水仙堿以200至600
mg/l的量被加入。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中氮和碳源是蛋白胨和葡萄糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中氮和碳源是蛋白胨和葡萄糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中加入發(fā)酵批次中的總底物
為2-4g/l。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中產(chǎn)物的回收是利用吸附樹
脂進(jìn)行的。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中產(chǎn)物的回收是利用吸附樹脂進(jìn)行的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其是通過回收含有產(chǎn)物的終發(fā)
酵液的75％-90％、向生物反應(yīng)器中剩余部分的發(fā)酵液中加入新的發(fā)酵培養(yǎng)
基并以新批次開始而以半連續(xù)方法進(jìn)行的。
9.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其是通過回收含有產(chǎn)物的終發(fā)酵液的
75％-90％、向生物反應(yīng)器中剩余部分的發(fā)酵液中加入新的發(fā)酵培養(yǎng)基并以
新批次開始而以半連續(xù)方法進(jìn)行的。
10.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其是通過回收含有產(chǎn)物的終發(fā)酵液的
75％-90％、向生物反應(yīng)器中剩余部分的發(fā)酵液中加入新的發(fā)酵培養(yǎng)基并以
新批次開始而以半連續(xù)方法進(jìn)行的。
11.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其是通過回收含有產(chǎn)物的終發(fā)酵液的
75％-90％、向生物反應(yīng)器中剩余部分的發(fā)酵液中加入新的發(fā)酵培養(yǎng)基并以
新批次開始而以半連續(xù)方法進(jìn)行的。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)的方法，其包括：
-在種子培養(yǎng)物中預(yù)先加入3-O-脫甲基類秋水仙堿，其中所述3-O-脫甲基
類秋水仙堿選自3-O-脫甲基秋水仙堿或3-O-脫甲基硫代秋水仙堿；
-在生物轉(zhuǎn)化開始時(shí)和生物轉(zhuǎn)化的最初14-18小時(shí)期間每1-3小時(shí)加入
300-800mg/l待轉(zhuǎn)化的類秋水仙堿底物的等分試樣，其中所述類秋水仙
堿底物是權(quán)利要求1中所定義的其中R₁是甲氧基的式(I)的化合物；和
-在每次底物加料時(shí)，加入含有下列原料的溶液：
a)蛋白胨或胰蛋白胨或酪蛋白水解物，終濃度為2-4g/l，與1-3g/l的
硫酸銨組合；
b)葡萄糖或果糖，終濃度為5-15g/l。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中生物轉(zhuǎn)化于25℃-35℃下
在4至8的pH下進(jìn)行。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中生物轉(zhuǎn)化于25℃-35℃下在4至8
的pH下進(jìn)行。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中使用每分鐘每升培養(yǎng)物
1-2升空氣的通氣水平。
16.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中使用每分鐘每升培養(yǎng)物1-2升空氣
的通氣水平。