本發明公開了一種添加維生素B提高谷氨酸脫羧酶產量的方法及應用，屬于酶工程和發酵工程技術領域。本發明采用導入了L?谷氨酸脫羧酶GAD基因的重組大腸桿菌，以半合成培養基、分批補料的發酵方式控制一定的比生長速率，在OD值為20?80時進行流加一定濃度乳糖進行誘導產酶，并在誘導過程中添加2?25mM維生素B6，誘導24h胞內谷氨酸脫羧酶酶活由對照(發酵過程中未添加維生素B)1293U/mL提高到3300U/mL；本發明還公布了一種利用該發酵工藝的重組酶進行無需添加輔酶生產γ?氨基丁酸的合成工藝，GABA積累量由對照的190g/L增加到374g/L。

1.一種提高谷氨酸脫羧酶產量的方法，其特征在于，是在表達谷氨酸脫羧酶基因的基
因工程菌的發酵過程中添加維生素B₆；所述基因工程菌是將Genebank號為NC_000913.3的
基因序列連接到pET-24a(+)載體后轉化到E.coli BL21(DE3)中得到的重組菌；所述基因工
程菌的發酵方法如下：在30-37℃培養，控制溶氧水平在15～30％、pH 6.5～7.5，當OD₆₀₀達
到20～80時，在25～30℃流加乳糖進行誘導產酶，并在誘導過程中添加維生素B₆，誘導18-
24h。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述維生素B₆的添加方式為一次性添加、分
批添加或恒速流加。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述維生素B₆在發酵液中的濃度控制在2-
30mM。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌的發酵方法如下：采用溫
度兩階段控制策略和恒溶氧分批補料技術高密度培養基因工程菌生產重組谷氨酸脫羧酶
的發酵工藝；在發酵過程中，以30-37℃恒溫培養，控制溶氧水平在15～30％，流加氨水控制
pH6.5～7.5，當OD₆₀₀達到20～80時，以25～30℃恒溫、恒速流加乳糖進行誘導產酶，并在誘
導過程中添加一定量的維生素B₆，誘導18-24h。
5.權利要求1-4任一所述方法在γ-氨基丁酸合成中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，是將發酵得到的基因工程菌細胞用緩沖液
洗滌并懸浮，添加終濃度為10-200g/L的L-谷氨酸或谷氨酸鈉到細胞懸浮液中，維持反應溫
度30-40℃，調節控制pH 4.5-5.5，每隔2-6h補加L-谷氨酸或谷氨酸鈉至終濃度為0-100g/
L，反應12-32h。
7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，是將發酵得到的基因工程菌進行細胞破碎
得到酶液，將酶液加入到L-谷氨酸或谷氨酸鈉終濃度為10-200g/L的反應體系中，維持反應
溫度30-40℃、pH 4.5-5.5，每隔2-6h補L-谷氨酸或谷氨酸鈉至終濃度為0-100g/L，反應12-
32h。