本發明涉及發酵培養技術領域，特別涉及一種綠膿桿菌發酵培養基及其發酵培養方法、疫苗制備方法。該發酵培養基包括蛋白胨、葡萄糖、酵母粉、氯化鈉、NaHPO、KHPO、MgSO、枸櫞酸鈉、尿素和復合維生素B。本發明發酵培養基適合綠膿桿菌高密度發酵生長，可大大提供綠膿桿菌的活菌數；與原有傳統培養基相比，本發明提供的改良培養基明顯將對數生長期由4～8h延長至4～10h，菌數由140～159億提高至240～250億，pH值穩定在7.0，大大提高了綠膿桿菌的產量。

1.一種綠膿桿菌發酵培養基，其特征在于，其有效成分由蛋白胨、葡萄糖、酵母粉、氯化
鈉、Na₂HPO₄、KH₂PO₄、MgSO₄、枸櫞酸鈉、尿素和復合維生素B組成；
以重量份計，所述培養基中各組分用量為：
蛋白胨10～30份，葡萄糖10～30份，酵母粉1～3份，氯化鈉4～6份，Na₂HPO₄ 1～5份，
KH₂PO₄ 0.4～1.6份，MgSO₄ 0.1～0.5份，枸櫞酸鈉0.1～0.5份，尿素2～6份，復合維生素B
0.0002～0.0004份；
所述復合維生素B為生物素、葉酸、核黃素、肌醇、鹽酸吡哆醇和尼古丁酸的混合物；所
述生物素、所述葉酸、所述核黃素、所述肌醇、所述鹽酸吡哆醇與所述尼古丁酸的質量比為
(10～20)：(1～5)：(150～200)：(1000～1200)：(400～500)：(400～500)；
所述培養基的pH值為7.0～7.2。
2.一種綠膿桿菌的發酵培養方法，其特征在于，包括如下步驟：
一級種子制備：取綠膿桿菌凍干菌接種于瓊脂培養基，36～37℃培養18～24h，挑菌落
接種于斜面培養基，36～37℃培養18～24h，獲得一級種子；
二級種子制備：取所述一級種子接種于液體培養基，36～37℃培養12h，然后再接種于
液體培養基，36～37℃培養12h，獲得二級種子；
發酵種子液制備：將所述二級種子接種于發酵培養基，在溫度37～37.5℃、攪拌速度
100～120r/min、進氣流量70～90L/min、壓力30～70Kpa條件下發酵培養7h，獲得發酵種子
液；
一級發酵：取所述發酵種子液接種于發酵培養基，在溫度37～37.5℃、攪拌速度80～
110r/min、進氣流量80～120L/min、壓力30～70Kpa條件下發酵培養12h，獲得一級發酵液；
二級發酵：取所述一級發酵液接種于發酵培養基，在溫度37～37.5℃、攪拌速度80～
100r/min、進氣流量90～136L/min、壓力30～70Kpa條件下發酵培養12h，獲得二級發酵液；
所述發酵培養基為權利要求1所述綠膿桿菌發酵培養基。
3.根據權利要求2所述的發酵培養方法，其特征在于，所述一級發酵培養至6～7h補加
葡萄糖和尿素，所述二級發酵培養至6～7h補加葡萄糖和尿素。
4.根據權利要求2所述的發酵培養方法，其特征在于，所述一級發酵中接種與發酵培養
之間還包括加入消泡劑的步驟，所述二級發酵中接種與發酵培養之間還包括加入消泡劑的
步驟。
5.根據權利要求2至4中任一項所述的發酵培養方法，其特征在于，所述發酵種子液制
備中二級種子的接種體積百分含量為2％，所述一級發酵中發酵種子液的接種體積百分含
量為3％，所述二級發酵中一級發酵液的接種體積百分含量為4％。
6.一種水貂出血性肺炎疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
一級種子制備：取綠膿桿菌凍干菌接種于瓊脂培養基，36～37℃培養18～24h，挑菌落
接種于斜面培養基，36～37℃培養18～24h，獲得一級種子；
二級種子制備：取所述一級種子接種于液體培養基，36～37℃培養12h，然后再接種于
液體培養基，36～37℃培養12h，獲得二級種子；
發酵種子液制備：將所述二級種子接種于發酵培養基，在溫度37～37.5℃、攪拌速度
100～120r/min、進氣流量70～90L/min、壓力30～70Kpa條件下發酵培養7h，獲得發酵種子
液；
一級發酵：取所述發酵種子液接種于發酵培養基，在溫度37～37.5℃、攪拌速度80～
110r/min、進氣流量80～120L/min、壓力30～70Kpa條件下發酵培養12h，獲得一級發酵液；
二級發酵：取所述一級發酵液接種于發酵培養基，在溫度37～37.5℃、攪拌速度80～
100r/min、進氣流量90～136L/min、壓力30～70Kpa條件下發酵培養12h，獲得二級發酵液；
疫苗脫毒：取所述二級發酵液脫毒，獲得水貂出血性肺炎疫苗；
所述發酵培養基為權利要求1所述綠膿桿菌發酵培養基。