一種高效疏水介質(zhì)的制備方法及其在純化蛇毒降纖酶中的應(yīng)用。其制備方法包括如下步驟：1）利用分散聚合法制備聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯(PGMA)微球；2）以聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯(PGMA)微球?yàn)榛|(zhì)制備高效疏水介質(zhì)；高效疏水介質(zhì)以20MPa壓力裝填于不銹鋼色譜柱中，然后將柱子連接液相色譜系統(tǒng)，用來純化蛇毒降纖酶。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于產(chǎn)品純度高、收率高、操作簡(jiǎn)便、達(dá)到產(chǎn)業(yè)化要求，利于推廣。

1.一種高效疏水介質(zhì)在純化蛇毒降纖酶中的應(yīng)用，其特征在于：1）利用分散聚合法制備聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球：分別稱取過氧化苯甲酰1g、聚乙烯吡咯烷酮5g、甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯?50g、乙醇?600ml、甲苯?70ml，將稱量好的原料加入到適當(dāng)?shù)牟ＡХ磻?yīng)瓶中,使其充分溶解并通氮?dú)獬?，然后置反?yīng)瓶于帶有旋轉(zhuǎn)和加熱裝置的設(shè)備上,于75攝氏度下聚合24h，反應(yīng)結(jié)束后,用沉降方法除去溶劑,并用乙醇充分洗滌,真空干燥24h，即得到顆粒分布呈現(xiàn)單分散的聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球；2）以聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球?yàn)榛|(zhì)，通過化學(xué)反應(yīng)接入疏水配基制備高效疏水介質(zhì)：將第一步所得聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球50g,置于250ml玻璃反應(yīng)器中，加入二氧六環(huán)50ml，調(diào)節(jié)水浴溫度為50℃，加入三氟化硼乙醚0.5ml，攪拌5min，然后加入正丁醇5ml繼續(xù)攪拌，反應(yīng)時(shí)間為30min，收集微球，純化水與二氧六環(huán)交替洗滌各三遍，最后用二氧六環(huán)洗滌兩遍；干燥即得丁基聚合物微球；3）將上一步合成所得丁基聚合物微球以20MPa壓力裝填于規(guī)格Ф2×25cm不銹鋼色譜柱中，然后將柱子連接于制備液相色譜系統(tǒng)，首先用純化水沖洗色譜柱300ml，以去除柱內(nèi)有機(jī)溶劑，然后用平衡液平衡色譜柱至基線平直，色譜柱平衡液為：20mmol/L磷酸鹽、pH值為7.5、內(nèi)含2mol/L硫酸銨；取降纖酶粗品經(jīng)親和層析所得產(chǎn)物、純度80%、總活性198000U的降纖酶中間體0.5g，加平衡液溶解至20ml，攪拌15min，離心取上清即為上樣原液，將上樣原液注入已平衡色譜柱中，接著以平衡液洗滌至基線平直；最后以平衡液為A相，以pH值為7.5的?20mmol/L磷酸鹽緩沖液為B相進(jìn)行梯度洗脫，梯度：B%:0%-100%??60min，檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm，收集主峰，得到降纖酶純度為95.1%，總活性178660U。2.一種高效疏水介質(zhì)在純化蛇毒降纖酶中的應(yīng)用，其特征在于：1）利用分散聚合法制備聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球：分別稱取過氧化苯甲酰15g、聚乙烯吡咯烷酮?100g、甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯?750g、乙醇?7000ml、甲苯?1200ml，將稱量好的原料加入到20L的玻璃反應(yīng)瓶中,使其充分溶解并通氮?dú)獬酰缓笾梅磻?yīng)瓶于帶有旋轉(zhuǎn)和加熱裝置的設(shè)備上,于70攝氏度下聚合30h，反應(yīng)結(jié)束后,用沉降方法除去溶劑,并用乙醇充分洗滌,真空干燥24h，即得到顆粒分布呈現(xiàn)單分散的聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球；2）以聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球?yàn)榛|(zhì)，通過化學(xué)反應(yīng)接入疏水配基制備高效疏水介質(zhì)：將第一步所得聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球375g,置于1000ml玻璃反應(yīng)器中，加入二氧六環(huán)375ml，調(diào)節(jié)水浴溫度為45℃，加入三氟化硼乙醚3.75ml，攪拌5min后加入正辛醇40ml繼續(xù)攪拌，反應(yīng)時(shí)間為40min，收集微球，純化水與二氧六環(huán)交替洗滌各三遍，最后用二氧六環(huán)洗滌兩遍；干燥即得辛基聚合物微球；3）將上一步合成所得辛基聚合物微球以20MPa壓力裝填于規(guī)格Ф5×25cm不銹鋼色譜柱中，然后將柱子連接于制備液相色譜系統(tǒng)，首先用純化水沖洗色譜柱3000ml，以去除柱內(nèi)有機(jī)溶劑，然后用平衡液平衡色譜柱至基線平直，色譜柱平衡液為：30mmol/L磷酸鹽、pH值為8.5、內(nèi)含1.5mol/L硫酸銨；取降纖酶粗品經(jīng)親和層析所得產(chǎn)物、純度80%、總活性1188000U的降纖酶中間體3g，加平衡液溶解至100ml，攪拌15min，離心取上清即為上樣原液，將上樣原液注入已平衡色譜柱中，接著以平衡液洗滌至基線平直；最后以平衡液為A相，以pH值為8.5的30mmol/L磷酸鹽緩沖液為B相進(jìn)行梯度洗脫，梯度：B%:0%-100%??60min，檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm，收集主峰，得到降纖酶純度為94.8%，總活性1069760U。3.一種高效疏水介質(zhì)在純化蛇毒降纖酶中的應(yīng)用，其特征在于：1）利用分散聚合法制備聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球：分別稱取偶氮二異丁腈?15g、聚乙烯吡咯烷酮?120g、甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯650g、乙醇?6500ml、甲苯?1000ml，將稱量好的原料加入到20L的玻璃反應(yīng)瓶中,使其充分溶解并通氮?dú)獬?，然后置反?yīng)瓶于帶有旋轉(zhuǎn)和加熱裝置的設(shè)備上,于75攝氏度下聚合36h，反應(yīng)結(jié)束后,用沉降方法除去溶劑,并用乙醇充分洗滌,真空干燥24h，即得到顆粒分布呈現(xiàn)單分散的聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球；2）以聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球?yàn)榛|(zhì)，通過化學(xué)反應(yīng)接入疏水配基制備高效疏水介質(zhì)：稱取第一步所得聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球375g,置于1000ml玻璃反應(yīng)器中，加入二氧六環(huán)375ml，調(diào)節(jié)水浴溫度為50℃，加入三氟化硼乙醚4ml，攪拌5min后加入液態(tài)苯酚40ml繼續(xù)攪拌，反應(yīng)時(shí)間為50min，收集微球，純化水與二氧六環(huán)交替洗滌各三遍，最后用二氧六環(huán)洗滌兩遍；干燥即得苯基聚合物微球；3）將上一步合成所得苯基聚合物微球以20MPa壓力裝填于規(guī)格Ф5×25cm不銹鋼色譜柱中，然后將柱子連接于制備液相色譜系統(tǒng)，首先用純化水沖洗色譜柱3000ml，以去除柱內(nèi)有機(jī)溶劑，然后用平衡液平衡色譜柱至基線平直，色譜柱平衡液為：50mmol/L磷酸鹽、pH值為7.5、內(nèi)含1.3mol/L硫酸銨；取降纖酶粗品經(jīng)親和層析所得產(chǎn)物、純度80%、總活性1188000U的降纖酶中間體3g，加平衡液溶解至100ml，攪拌15min，離心取上清即為上樣原液，將上樣原液注入已平衡色譜柱中，接著以平衡液洗滌至基線平直，最后以平衡液為A相，以pH值為7.5的50mmol/L磷酸鹽緩沖液為B相進(jìn)行梯度洗脫，梯度：B%:0%-100%??60min，檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm，收集主峰，得到降纖酶純度為99.5%，總活性1089890U。