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一種強化光滑球擬酵母合成丙酮酸方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-09-25
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201611112789.5 
  • 技術(專利)名稱 一種強化光滑球擬酵母合成丙酮酸方法 
  • 項目單位 江南大學
  • 發(fā)明人 周景文,陳堅,羅正山,堵國成,劉松,方芳 
  • 行業(yè)類別 健康產品質檢-標準化和計量
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 沈思菡
  • 發(fā)布時間 2021-09-25  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種強化光滑球擬酵母合成丙酮酸方法,屬于發(fā)酵工程技術領域。本發(fā)明通過在光滑球擬酵母菌株中過表達磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和丙酮酸羧化酶引入ATP無效循環(huán),降低胞內ATP水平,從而增強光滑球擬酵母菌株丙酮酸的產量和生產強度,通過基因工程技術,將來源于釀酒酵母的PYC2基因和PCK1基因融合過表達于TgU?中,獲得了一株高產丙酮酸和高丙酮酸發(fā)酵強度的工程菌株TgU?(pY26?PYC2?PCK1),相對于對照菌株,工程菌TgU?(pY26?PYC2?PCK1)的葡萄糖消耗速率、丙酮酸的產量、底物轉化率和丙酮酸生產強度分別提高了15.6%、50.0%、54.5%和81.5%。
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  • 02

    說明書

    1.一種丙酮酸產量和生產強度提高的重組菌,其特征在于,所述重組菌是融合表達了丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的重組光滑球擬酵母。2.根據權利要求1所述的重組菌,其特征在于,所述重組菌是以缺失了URA3基因的T.glabrata CCTCC M 202019為宿主,以pY26-TEF-GPD為載體,共表達Gene ID:852519的基因PYC2和Gene ID:853972的基因PCK1。3.權利要求1所述重組菌的構建方法,其特征在于,以光滑球擬酵母為宿主,以pY26-TEF-GPD為載體,共表達釀酒酵母來源的基因PYC2和PCK1。4.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法是將Gene ID:852519的基因PYC2和Gene ID:853972的基因PCK1與載體pY26-TEF-GPD連接,再在缺失了URA3基因的光滑球擬酵母T.glabrata CCTCC M 202019中表達。5.一種提高丙酮酸產量和生產強度的方法,其特征在于,所述方法是在光滑球擬酵母中構建ATP無效循環(huán);所述構建ATP無效循環(huán)是融合并過量表達磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和丙酮酸羧化酶。6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶由Gene ID:852519的PYC2基因編碼;所述丙酮酸羧化酶由Gene ID:853972的PCK1基因編碼。7.一種利用權利要求1所述重組菌發(fā)酵生產丙酮酸的方法,其特征在于,將重組菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中,于28-30℃,400-600rpm,1-3vvm發(fā)酵。8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基每L含有:葡萄糖50-120g,尿素0-5g,MgSO4·7H2O 0-1g,KH2PO4 0-5g,CH3COONa 0-5g,微量元素液10ml,維生素液10ml,初始pH=5.5;所述微量元素液每L含有:MnCl2·4H2O 0-12g,F(xiàn)eSO4·7H2O 0-2g,CaCl2·2H2O 0-2g,CuSO4·5H2O 0-2g,ZnCl2 0-0.1g;所述維生素液每L含有:生物素0-0.01g,硫胺素0-2mg,吡哆醇0-0.2g,煙酸0-2g。9.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述接種是以體積比為5-10%的接種量進行接種。10.權利要求1-4任一所述重組菌在食品、化工、醫(yī)藥、農業(yè)領域制備含丙酮酸的產品中的應用。
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專利技術附圖

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