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乳酸片球菌菌株及其生產片球菌素的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-28
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201010566509.4 
  • 技術(專利)名稱 乳酸片球菌菌株及其生產片球菌素的方法 
  • 項目單位 天津大學
  • 發明人 周志江,韓燁,李靜 
  • 行業類別 智慧健康-物聯網
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 錢志娟
  • 發布時間 2021-09-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種乳酸片球菌(Pediococcus acidilatici)P2CGMCC No.4213以及采用所述乳酸片球菌P2生產乳酸片球菌素的方法,將乳酸片球菌菌株P2培養活化后接種至本發明提供的改良MRS培養基進行發酵培養,發酵培養方法如下:將活化的乳酸片球菌菌種P2接種至改良MRS發酵培養基中,發酵溫度為35-37℃,pH值5.5-7.5,培養時間15-22h,接種量0.3-0.6%,發酵液溶解氧保持20-25%,發酵培養過程中流加葡萄糖;培養1522小時后從發酵產物中提取片球菌素。用本發明提供的改良MRS培養基和經優化的培養發酵條件下進行發酵,片球菌素產量達到22,000AU/mL以上,結合使用本發明提供的從細胞內提取未分泌的片球菌素的方法,總片球菌素產量達27,500AU/mL以上,適用于大規模工業化生產。
    展開
  • 02

    說明書

    1.乳酸片球菌(Pediococcus?acidilatici)P2CGMCC?No.4213。2.一種采用權利要求1所述乳酸片球菌(Pediococcus?acidilatici)P2CGMCC?No.4213生產乳酸片球菌素的方法,其特征在于,包括以下步驟:(a)將保存的乳酸片球菌菌株P2CGMCC?No.4213接種于MRS平板,37℃培養24-36h,挑取典型的單個菌落,接種于MRS液體培養基,培養活化;(b)活化后接種至本發明提供的改良MRS培養基進行發酵培養,發酵培養方法如下:將活化的乳酸片球菌菌種P2CGMCC?No.4213接種至改良MRS發酵培養基中,發酵溫度為35-37℃,pH值5.5-7.55,培養時間15-22h,接種量0.3-0.6%,發酵液溶解氧保持20-25%,發酵培養過程中流加葡萄糖;所述改良MRS培養基每升組成為:酪蛋白胨7-10g,牛肉膏10-15g,酵母提取物5-9g,葡萄糖3-5g,乙酸鈉3-5g,檸檬酸胺1-5g,吐溫801-2mL,磷酸氫二鉀1-2g,硫酸鎂0.2-2g,硫酸錳0.1-0.5g,碳酸鈣10-20g,pH6.2-6.8;(c)培養15-22小時后從發酵產物中提取片球菌素。3.根據權利要求2所述生產乳酸片球菌素的方法,其特征在于,所述步驟(b)發酵過程中流加葡萄糖為發酵培養7小時后按0.025g/L濃度流加葡萄糖,每5升發酵液體積按2ml/min的流加速度進行間歇流加。4.根據權利要求2所述生產乳酸片球菌素的方法,其特征在于,所述步驟(c)從發酵產物中提取片球菌素包括細胞外細菌素和細胞內細菌素,所述細胞內細菌素的提取方法為:首先將菌液pH值調到2.0,4℃電磁攪拌12h,離心棄上清得菌體,加無菌水清洗沉淀菌體,再離心棄上清得菌體;然后將菌體重懸于細胞壁裂解液Ⅰ中,在37℃條件下保持15min,加入細胞壁裂解液Ⅱ,迅速混勻,常溫保持7min,離心取上清液,在70℃條件下保持30min,滅酶;所述細胞壁裂解液Ⅰ為25%蔗糖,30mg/ml溶菌酶;所述細胞壁裂解液Ⅱ為3%SDS,0.2M?NaOH。?
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