本發(fā)明涉及一種結(jié)核分枝桿菌雙相快速鑒別培養(yǎng)基的制備方法及使用該培養(yǎng)基快速鑒別結(jié)核分枝桿菌的方法、測(cè)定結(jié)核分枝桿菌對(duì)抗結(jié)核藥的耐藥性方法及使用該培養(yǎng)基中的液體培養(yǎng)基快速培養(yǎng)卡介苗的方法。本發(fā)明制備的雙相培養(yǎng)基能用于結(jié)核分枝桿菌的快速培養(yǎng)，雙相快速培養(yǎng)基能在2-5天鑒別出結(jié)核分枝桿菌，并且可利用反轉(zhuǎn)錄PCR方法對(duì)鑒別出的結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行利福平、異煙肼、鏈霉素抗結(jié)核藥的耐藥性檢測(cè)，本發(fā)明制備的液體培養(yǎng)基可在6-9天完成卡介苗的培養(yǎng)。

1.一種結(jié)核分枝桿菌雙相快速鑒別培養(yǎng)基，其特征在于：培養(yǎng)基的制備方法如下：（1）固體培養(yǎng)基的制備：a.稱取鹽酸吡哆醇1～5mg、谷氨酸鈉180～220mg、氯化鈣10～20mg、硫酸鎂15～25mg、檸檬酸鐵銨80～120mg、檸檬酸鈉180～220mg、硫酸銨380～420mg、丙酮酸鈉950～1050mg、氯化銅1～10mg、氯化鋅1～10mg、天門冬素1950～2050mg、磷酸二氫鉀15～25mg和磷酸二氫鈉15～25mg溶于蒸餾水600～700ml中，121℃加熱15～20分鐘，冷卻至20-25℃，得到固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液；b.稱取中性甘油8ml、1%孔雀綠水溶液15ml和雞卵液1000ml加入步驟a所得固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液中，混合均勻，分裝于無菌培養(yǎng)管內(nèi)，每管7～10ml；c.將b步驟所得無菌培養(yǎng)管于80～90℃加熱10～20分鐘，冷卻至20-25℃，得到固體培養(yǎng)基，將固體培養(yǎng)基于4℃保存?zhèn)溆茫唬?）液體培養(yǎng)基的制備：a.稱取氯化鈣1～10mg、硫酸鎂5～15mg、油酸15～20mg、枸櫞酸鐵銨5～15mg、枸櫞酸鈉5～100mg、硫酸銨180～220mg、氯化銅1～10mg、氯化鋅5～15mg、丙酮酸鈉400～500mg、吐溫-800.5～1ml、天門冬素950～1050mg、磷酸二氫鉀950～1050mg和磷酸二氫鈉1750～1850mg溶于蒸餾水450～600ml中，121℃加熱15～20分鐘，冷卻至20-25℃，得到液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液；b.稱取鹽酸吡哆醇0.15g、甘油5ml、酵母浸液4ml、過氧化氫酶0.2g、生物素0.15g、聚氧乙烯硬脂酸酯0.6g、牛血清白蛋白200g、酪蛋白消化物2g和分枝桿菌培養(yǎng)上清液5ml加入馬鈴薯汁500ml中，混合均勻，過濾除菌，得到促生長因子混合液；c.將步驟a所得液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液與步驟b所得促生長因子混合液按體積比1:1混合均勻，得液體培養(yǎng)基混合液，向其中添加過濾除菌后的抑菌劑，得到液體培養(yǎng)基；所述的抑菌劑為多粘菌素B、氨芐青霉素和兩性霉素B，且三者的質(zhì)量與液體培養(yǎng)基混合液的質(zhì)量體積比均為0.1mg/ml；（3）將步驟（2）所得液體培養(yǎng)基加入步驟（1）所得固體培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基的體積比為1：1～1：3，得到結(jié)核分枝桿菌雙相培養(yǎng)基；（4）在結(jié)核分枝桿菌雙相培養(yǎng)基液體中加入噻吩-2-羧酸肼0.1ml或?qū)ο趸郊姿?.1ml，得到結(jié)核分枝桿菌雙相快速鑒別培養(yǎng)基。2.如權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核分枝桿菌雙相快速鑒別培養(yǎng)基，其特征在于：固體培養(yǎng)基的制備：a.稱取鹽酸吡哆醇1mg、谷氨酸鈉200mg、氯化鈣20mg、硫酸鎂20mg、檸檬酸鐵銨100mg、檸檬酸鈉200mg、硫酸銨400mg、丙酮酸鈉1000mg、氯化銅5mg、氯化鋅5mg、天門冬素2000mg、磷酸二氫鉀20mg和磷酸二氫鈉20mg溶于蒸餾水650ml中，121℃加熱18分鐘，冷卻至20℃，得到固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液；b.稱取中性甘油8ml、1%孔雀綠水溶液15ml和雞卵液1000ml加入步驟a所得固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液中，混合均勻，分裝于無菌培養(yǎng)管內(nèi)，每管8ml；c.將步驟b所得無菌培養(yǎng)管于85℃加熱15分鐘，冷卻，得到固體培養(yǎng)基，將固體培養(yǎng)基于4℃保存?zhèn)溆谩?.如權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核分枝桿菌雙相快速鑒別培養(yǎng)基，其特征在于：液體培養(yǎng)基的制備中，液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液的制備步驟，具體如下：稱取氯化鈣5mg、硫酸鎂10mg、油酸18mg、枸櫞酸鐵銨10mg、枸櫞酸鈉50mg、硫酸銨200mg、氯化銅5mg、氯化鋅10mg、丙酮酸鈉450mg、吐溫-800.8ml、天門冬素1000mg、磷酸二氫鉀1000mg和磷酸二氫鈉1800mg溶于蒸餾水500ml中，121℃加熱18分鐘，冷卻至20℃，得到液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)液。