本發明提供了一種利用赭曲霉在兩相系統中催化生產11α-羥基-16α，17α-環氧黃體酮的方法。通過添加有機溶劑鄰苯二甲酸二丁酯，有效地解決底物和產物的溶解問題，增加與細胞的接觸面積，簡化分離過程，縮短了轉化的時間，大大提高了底物的轉化率，16α，17α-環氧黃體酮轉化率可達84％以上，為生產出高收率、高純度的11α-羥基-16α，17α-環氧黃體酮奠定了堅實的實踐生產基礎，從而降低了生產成本，提高了企業經濟效益。

1.一種提高16α,17α-環氧黃體酮轉化率的方法，包括以下步驟：
(1)斜面制備
將赭曲霉試管菌種接種于土豆斜面培養基，25-28℃恒溫培養4-7d生成黃色孢子，然后
轉接在酵母膏斜面培養基斜面上，25-28℃培養7-10d，可生成金黃色孢子，即得生產用斜
面，于冰箱中4℃恒溫保存2-3個月備用；
(2)孢子懸液制備
將含2‰(w/v)吐溫80的無菌水加入步驟(1)保存的生產斜面中，洗下孢子，血球計
數板計數，配制、調整孢子懸液濃度為4×10⁶-8×10⁶個/mL；
(3)靜息細胞制備
將步驟(2)中的孢子懸液按8-10％的接種量接入液體培養基，28-30℃培養24-30h后，
發酵液抽濾，用3-5倍的無菌水洗滌菌體兩遍，即得菌體靜息細胞；
(4)兩相體系中的轉化
向加塞瓶中加入雙液相培養基和步驟(3)中的靜息細胞，同時加入16α,17α-環氧黃
體酮和濃度為30％的H₂O₂溶液，于28-30℃，180-200r/min振蕩培養46-48h；所述雙液相培
養基由無菌水和鄰苯二甲酸二丁酯按質量比為3:1-4:1混合而成；所述靜息細胞的添加量為
雙液相培養基的7-10％；
(5)過濾
將步驟(4)中的發酵液于室溫用500-800目濾布預涂硅藻土，采用板框過濾機進行過濾，
操作壓力為0.14-0.24Mpa；所述硅藻土粒度為100目-300目；
(6)萃取
將步驟(5)中的濾液于80℃加熱30min，冷卻至室溫，以乙酸乙酯萃取3次；
(7)結晶
萃取后利用旋轉蒸發儀將有機相濃縮，室溫冷卻結晶；
(8)重結晶精制
結晶產物再用82％(v/v)氯仿－甲苯混合溶劑進行重結晶精制，60℃烘干至恒重，既
得11α-羥基-16α,17α-環氧黃體酮白色針狀結晶體；
所述赭曲霉為赭曲霉(Aspergillus?ochraccus)，菌種保藏于天津科技大學工業微生物
菌種保藏中心，保藏編號為TCCC41060。
2.如權利要求1所述的一種提高16α,17α-環氧黃體酮轉化率的方法，其特征在于，所述雙
液相培養基每100ml添加1-2g?16α,17α-環氧黃體酮。
3.如權利要求1所述的一種提高16α,17α-環氧黃體酮轉化率的方法，其特征在于，所述
H₂O₂溶液的添加量為雙液相培養基的0.8-1.2％。
4.如權利要求1所述的一種提高16α,17α-環氧黃體酮轉化率的方法，其特征在于，所述
土豆斜面培養基組成為：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L，酵母膏1g/L，
純凈水1000mL,pH值6.8,121℃蒸汽滅菌20min。
5.如權利要求1所述的一種提高16α,17α-環氧黃體酮轉化率的方法，其特征在于，所述酵
母膏斜面培養基組成為：葡萄糖20g/L，大豆蛋白胨20g/L，酵母膏20g/L，瓊脂20g
/L，純凈水1000mL,pH值5.8,121℃蒸汽滅菌20min。
6.如權利要求1所述的一種提高16α,17α-環氧黃體酮轉化率的方法，其特征在于，所述
液體培養基組成為：葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏20g/L、MgSO₄2g/L，純凈
水1000mL，pH值5.8，121℃蒸汽滅菌20min。