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一種新金分枝桿菌及其在制備9-羥基黃體酮中的應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-28
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710911172.8 
  • 技術(專利)名稱 一種新金分枝桿菌及其在制備9-羥基黃體酮中的應用 
  • 項目單位 沈陽博泰生物制藥有限公司
  • 發明人 張馳,張鑫,隋靚 
  • 行業類別 醫藥制造-化學藥品制劑
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王韶韻
  • 發布時間 2021-12-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供一種用于將黃體酮轉化為9?羥基黃體酮的新金分枝桿菌突變株MN?ZX1及其應用,該菌株的保藏編號為CGMCC No.13901。本發明還提供了基于該新金分枝桿菌制備9?羥基黃體酮的方法。本發明提供的新金分枝桿菌與傳統的轉化方法相比,工藝簡單,得率高,副產物少,并且對環境沒有污染;本發明的菌株MN?ZX1,具有高產性狀穩定的特點,該菌株經過20代的傳代,性能保持穩定。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種新金分枝桿菌(Mycobacterium neoaurum),該新金分枝桿菌的保藏編號為CGMCC No.13901。2.根據權利要求1所述的新金分枝桿菌在制備9-羥基黃體酮中的用途。3.一種9-羥基黃體酮的制備方法,其特征在于,所述方法包括使用如權利要求1所述的新金分枝桿菌將黃體酮轉化為9-羥基黃體酮。4.如權利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:1)將如權利要求1所述的新金分枝桿菌接種于種子培養基進行培養,得到種子培養物;其中,所述種子培養的培養基為BPYG培養基;所述BPYG培養基包括以下組分:牛肉膏0.3g/L,蛋白胨1.0g/L,酵母粉0.3g/L,甘油1.5g/L,調節pH至7.0;2)在發酵罐中,在黃體酮的存在下,將步驟1)的種子培養物接種于轉化培養基發酵培養;3)將步驟2)發酵培養后的發酵液離心,取沉淀溶于甲醇中,離心取上清液,將上清液蒸餾結晶,并將結晶置于水中,降溫析晶,抽濾后減壓干燥,既得。5.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,所述種子培養為振蕩培養。6. 根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述培養為在28-32℃下,以200-250轉/分振蕩培養36-60 h。7. 根據權利要求6所述的方法,其特征在于,所述培養為在32℃下,以200-250轉/分振蕩培養48 h。8.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,在步驟2)中,所述轉化培養基包括以下組分:大豆蛋白胨1~5 g/L,酵母提取物0.5~2 g/L,葡萄糖0.5~2 g/L,檸檬酸0.1~0.3g/L,檸檬酸鐵銨0.01~0.05g/L,K2HPO4 0.5~1.5g/L,MgSO4·7H2O 0.01~0.1g/L,NH4NO3 0.1~0.5g/L,黃體酮0.1~1.5g/L;調節pH至6.5-7.5。9.根據權利要求8所述的方法,其特征在于,所述轉化培養基包括以下組分:大豆蛋白胨3 g/L,酵母提取物1 g/L,葡萄糖1.0g/L,檸檬酸0.2g/L,檸檬酸鐵銨0.01g/L,K2HPO4 1.0g/L,MgSO4·7H2O 0.05g/L,NH4NO3 0.3g/L,黃體酮1.5g/L;調節pH至7.0。10.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,在步驟2)中,所述發酵培養中,種子培養物的體積比例為3-10%。11.根據權利要求10所述的方法,其特征在于,在步驟2)中,所述發酵培養中,種子培養物的體積比例為4-6%。12.根據權利要求11所述的方法,其特征在于,在步驟2)中,所述發酵培養中,種子培養物的體積比例為5%。13.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,所述發酵培養為搖瓶振蕩培養或發酵罐深層培養。14.根據權利要求13所述的方法,其特征在于,所述搖瓶振蕩培養為在28-32℃下,以200-250轉/分搖瓶振蕩培養5-10天。15.根據權利要求14所述的方法,其特征在于,所述搖瓶振蕩培養為在32℃下。16.根據權利要求13所述的方法,其特征在于,所述深層發酵培養為通氣攪拌培養,溫度為28-32℃,pH為7.0-7.2,發酵時間為7-10天。17.根據權利要求16所述的方法,其特征在于,所述深層發酵培養為通氣攪拌培養,溫度為32℃。18.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,在步驟2)中,在培養過程中,還向轉化培養基中添加底物黃體酮,添加的量為每升發酵液加入1-10g黃體酮,添加次數為2次。19.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,所述步驟3)包括:稱取步驟2)發酵培養后的發酵液,4000-6000 rpm離心10 min;取沉淀加入3-5倍體積的甲醇,加熱至回流10min,然后4000-6000rpm離心10min,將上清液在30℃減壓蒸餾使產品結晶,繼續蒸餾至蒸出液甲醇含量低于3%,加1倍體積的水,降溫至-20℃析晶,保持1-2h,抽濾,濾餅用-5℃甲醇淋洗,45℃減壓干燥2 h,既得。20.根據權利要求4-19中任一項所述的方法,其特征在于,所述方法還包括檢測步驟。21.根據權利要求20所述的方法,其特征在于,所述檢測包括:將得到的產物用乙腈溶解,配制1mg/mL的溶液,并通過0.22μm的有機膜過濾除雜,濾液利用高效液相色譜法分析9-羥基黃體酮的含量。22. 根據權利要求21所述的方法,其特征在于,所述HPLC的條件為高效液相色譜柱為安捷倫ZORBAX SB C18,所述色譜柱的規格為5μm,4.6×150mm,色譜條件采用梯度洗脫,水為A相,甲醇為B相,流速為1.0mL/min;洗脫條件如下:體積比百分數為30-95%的B/A%相甲醇水溶液:0-15.0min;體積比百分數為95%的B/A%相甲醇水溶液:15.0-20.0min;平衡時間5min。
    展開

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