本發明提供了一種維生素D合成抗原及其制備方法，所述維生素D合成抗原為維生素D與蛋白載體的偶聯物，所述維生素D為25-羥基維生素D3或1,25-二羥維生素D3，所述蛋白載體為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白、人血清白蛋白中的一種或多種。本發明還提供所述維生素D合成抗原在維生素D免疫學檢測中的應用。本發明進一步提供維生素D檢測試劑盒，其集成了現有臨床維生素D檢測方法的優點，可適用于所有酶標儀、化學發光儀和時間分辨分析儀，檢測時間大大縮短，且靈敏度、準確度、精密度均可滿足檢測要求。采用本發明的通用性強的免疫吸附檢測試劑盒，可實現血清（或血漿）中維生素D的批量、快速檢測。

1.一種維生素D合成抗原，其特征在于，其為維生素D與蛋白載
體的偶聯物，所述維生素D為25-羥基維生素D3或1,25-二羥維生素D3，
所述蛋白載體為牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白中的一種或
多種；
所述維生素D與蛋白載體的重量比為1:16～20；
維生素D合成抗原的制備方法包括如下步驟：
1)將蛋白載體溶于pH8.5的緩沖液中，得溶液A；
2)將維生素D溶于乙醇、二甲基亞砜或吡啶中，得溶液B；
3)分別向溶液A和B中加入活化劑，得到活化的蛋白載體和維生
素D；
4)以N,N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙
基碳二亞胺鹽酸鹽或N,N'-二環已基碳二亞胺為偶聯劑，將上述活化
的蛋白載體和維生素D進行偶聯；
5)透析、干燥，即得維生素D合成抗原；
其中，步驟3)中所述活化劑為含乙二胺和乙二胺二鹽酸鹽的磷
酸氫二鈉溶液、4-二甲氨基吡啶-丙酮混合液、戊二醛或甲醛。
2.制備權利要求1所述維生素D合成抗原的方法，其特征在于，
包括步驟：
1)將蛋白載體溶于pH8.5的緩沖液中，得溶液A；
2)將維生素D溶于乙醇、二甲基亞砜或吡啶中，得溶液B；
3)分別向溶液A和B中加入活化劑，得到活化的蛋白載體和維生
素D；
4)以N,N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙
基碳二亞胺鹽酸鹽或N,N'-二環已基碳二亞胺為偶聯劑，將上述活化
的蛋白載體和維生素D進行偶聯；
5)透析、干燥，即得維生素D合成抗原；
其中，步驟3)中所述活化劑為含乙二胺和乙二胺二鹽酸鹽的磷
酸氫二鈉溶液、4-二甲氨基吡啶-丙酮混合液、戊二醛或甲醛。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述的
緩沖液為磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液或Tris緩沖液。
4.權利要求1所述維生素D合成抗原在維生素D免疫學檢測中的
應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，其是將所述維生素
D合成抗原與標記物結合作為競爭性抗原，通過與樣品中的維生素D
競爭結合維生素D單克隆抗體，從而檢測樣品中的維生素D含量。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述標記物為:
a)辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶；
b)吖啶酯類化合物；或
c)螯合有Eu³⁺、Sm³⁺、Tb³⁺或Dy³⁺的二乙烯三胺五乙酸、2-[(4-
氰基苯基)甲基]-1,4,7,10-四氮環十二烷-1,4,7,10-四乙酸或4,7-二氯磺
基苯-1,10-菲羅啉-2,9-二羧酸。
7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述維生素D單克
隆抗體為Abcam公司的維生素D單抗產品。
8.維生素D免疫學檢測試劑盒，其特征在于，其包括包被維生
素D單克隆抗體的酶標板、權利要求1所述的維生素D合成抗原經標記
物標記后得到的競爭性抗原；
其中，所述維生素D單克隆抗體為Abcam公司的維生素D單抗產
品；所述標記物為：a)辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶；b)魯米諾或
吖啶酯類化合物；或c)螯合有Eu³⁺、Sm³⁺、Tb³⁺或Dy³⁺的二乙烯三胺
五乙酸、2-[(4-氰基苯基)甲基]-1,4,7,10-四氮環十二烷-1,4,7,10-四乙酸
或4,7-二氯磺基苯-1,10-菲羅啉-2,9-二羧酸。
9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包
括洗滌液、維生素D標準品、底物顯色液、反應終止液中的一種或多
種。