1.一種維生素D合成抗原,其特征在于,其為維生素D與蛋白載
體的偶聯物,所述維生素D為25-羥基維生素D3或1,25-二羥維生素D3,
所述蛋白載體為牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白中的一種或
多種;
所述維生素D與蛋白載體的重量比為1:16~20;
維生素D合成抗原的制備方法包括如下步驟:
1)將蛋白載體溶于pH8.5的緩沖液中,得溶液A;
2)將維生素D溶于乙醇、二甲基亞砜或吡啶中,得溶液B;
3)分別向溶液A和B中加入活化劑,得到活化的蛋白載體和維生
素D;
4)以N,N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙
基碳二亞胺鹽酸鹽或N,N'-二環已基碳二亞胺為偶聯劑,將上述活化
的蛋白載體和維生素D進行偶聯;
5)透析、干燥,即得維生素D合成抗原;
其中,步驟3)中所述活化劑為含乙二胺和乙二胺二鹽酸鹽的磷
酸氫二鈉溶液、4-二甲氨基吡啶-丙酮混合液、戊二醛或甲醛。
2.制備權利要求1所述維生素D合成抗原的方法,其特征在于,
包括步驟:
1)將蛋白載體溶于pH8.5的緩沖液中,得溶液A;
2)將維生素D溶于乙醇、二甲基亞砜或吡啶中,得溶液B;
3)分別向溶液A和B中加入活化劑,得到活化的蛋白載體和維生
素D;
4)以N,N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙
基碳二亞胺鹽酸鹽或N,N'-二環已基碳二亞胺為偶聯劑,將上述活化
的蛋白載體和維生素D進行偶聯;
5)透析、干燥,即得維生素D合成抗原;
其中,步驟3)中所述活化劑為含乙二胺和乙二胺二鹽酸鹽的磷
酸氫二鈉溶液、4-二甲氨基吡啶-丙酮混合液、戊二醛或甲醛。
3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,步驟1)中所述的
緩沖液為磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液或Tris緩沖液。
4.權利要求1所述維生素D合成抗原在維生素D免疫學檢測中的
應用。
5.根據權利要求4所述的應用,其特征在于,其是將所述維生素
D合成抗原與標記物結合作為競爭性抗原,通過與樣品中的維生素D
競爭結合維生素D單克隆抗體,從而檢測樣品中的維生素D含量。
6.根據權利要求5所述的應用,其特征在于,所述標記物為:
a)辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶;
b)吖啶酯類化合物;或
c)螯合有Eu3+、Sm3+、Tb3+或Dy3+的二乙烯三胺五乙酸、2-[(4-
氰基苯基)甲基]-1,4,7,10-四氮環十二烷-1,4,7,10-四乙酸或4,7-二氯磺
基苯-1,10-菲羅啉-2,9-二羧酸。
7.根據權利要求5所述的應用,其特征在于,所述維生素D單克
隆抗體為Abcam公司的維生素D單抗產品。
8.維生素D免疫學檢測試劑盒,其特征在于,其包括包被維生
素D單克隆抗體的酶標板、權利要求1所述的維生素D合成抗原經標記
物標記后得到的競爭性抗原;
其中,所述維生素D單克隆抗體為Abcam公司的維生素D單抗產
品;所述標記物為:a)辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶;b)魯米諾或
吖啶酯類化合物;或c)螯合有Eu3+、Sm3+、Tb3+或Dy3+的二乙烯三胺
五乙酸、2-[(4-氰基苯基)甲基]-1,4,7,10-四氮環十二烷-1,4,7,10-四乙酸
或4,7-二氯磺基苯-1,10-菲羅啉-2,9-二羧酸。
9.根據權利要求8所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包
括洗滌液、維生素D標準品、底物顯色液、反應終止液中的一種或多
種。
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