1.一種凝血因子Ⅷ親和層析樹脂的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步
驟：
a、首先稱取保存于冰箱中20％乙醇水溶液中的瓊脂糖凝膠Sepharose CL-6B即瓊脂糖
凝膠CL-6B，采用過量蒸餾水進行反復洗滌，除去瓊脂糖凝膠表面的乙醇，得到濕瓊脂糖凝
膠；
b、環氧氯丙烷活化法活化凝膠：
稱取步驟a所得濕瓊脂糖凝膠，置于0.1～0.5M的NaOH溶液中，所述NaOH溶液加入的體
積量是濕瓊脂糖凝膠重量的3～5倍；然后在25～35℃條件下恒溫震蕩0.5～2h，恒溫震蕩時
振動速度為100～200轉/min；
震蕩后取出凝膠進行充分水洗，水洗后進行真空抽濾，然后加入到1mol/L的NaOH溶液
中，所述NaOH溶液加入的體積量是凝膠重量的3～5倍；然后在20～30℃、180～220轉/分條
件下恒溫振蕩30～40分鐘；震蕩后靜置30～40min，將上清液棄去，得到沉淀凝膠；
得到沉淀凝膠后，以占沉淀凝膠體積百分比50％的二甲基亞礬或占沉淀凝膠體積百分
比50％的1,4-二氧六環為活化溶劑，并加入占沉淀凝膠體積百分比20％的環氧氯丙烷，在
25～35℃、180～220轉/分條件下恒溫振蕩反應9～12h；反應結束后對所得產物進行抽濾，
抽濾后所得產物采用蒸餾水反復洗滌至濾液為中性，洗滌后進行抽濾，得到活化凝膠；
c、手臂連接：
將步驟b所得活化凝膠與間隔臂分子N-羥基琥珀酰亞胺NHS懸浮于2mol/L、酸堿度為
9.5的碳酸鹽緩沖溶液中，所述活化凝膠與間隔臂分子之間加入量的摩爾比為1:5～8，所述
碳酸鹽緩沖溶液的加入量為活化凝膠體積的3倍；然后在55～65℃、180～220轉/分條件下
恒溫振蕩1～1.5h，進行“手臂”分子鍵合反應；反應后得到手臂連接的凝膠；
d、配基偶聯反應：
稱取步驟c所得手臂連接的凝膠，加入與間隔臂分子N-羥基琥珀酰亞胺NHS等摩爾數的
肽配基及碳化二亞胺EDC，在25～35℃、180～220轉/分條件下恒溫振蕩進行配基偶聯反應
1.5～2.5h；
所述肽配基為肽配基EYCPC、肽配基GCVSGCLCWEYC和肽配基RKWNCTDHEYC中的至少一
種；
e、稱取步驟d偶聯反應所得產物，加入所得產物溶液體積1/10的1mol/L的醋酸水溶液，
在25～35℃、100～200轉/min條件下恒溫振蕩2～2.5h；震蕩后所得產物裝入層析柱中將液
體抽濾后，采用去離子水洗滌3～4次；每次加入去離子水的體積為濕凝膠5倍體積；洗滌后
加入濕凝膠體積1/2的1mol/L的乙醇胺，接著在25～35℃、100～200轉/min條件下恒溫振蕩
反應2～2.5h；所得產物即為凝血因子Ⅷ親和層析樹脂；
f、將步驟e所得產物采用去離子水沖洗，最后再用20％乙醇溶液沖洗3～4次，每次加入
的乙醇溶液體積為濕凝膠5倍體積；沖洗后將所得產物存放于凝膠體積3倍的20％乙醇溶液
中在4℃條件下存放。
2.根據權利要求1所述的凝血因子Ⅷ親和層析樹脂的制備方法，其特征在于：步驟a中
所述瓊脂糖凝膠Sepharose CL-6B即瓊脂糖凝膠CL-6B由瓊脂糖凝膠微球或葡聚糖凝膠微
球替代。
3.根據權利要求1所述的凝血因子Ⅷ親和層析樹脂的制備方法，其特征在于：所述肽配
基EYCPC、肽配基GCVSGCLCWEYC或肽配基RKWNCTDHEYC均按照常規多肽合成方法制備而成。
4.根據權利要求1所述的凝血因子Ⅷ親和層析樹脂的制備方法，其特征在于：所述肽配
基EYCPC、肽配基GCVSGCLCWEYC和肽配基RKWNCTDHEYC的純度均≥95％。
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