本發明公開了一種檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法及診斷試劑盒，通過對PCA3基因的mRNA和/或PSA基因的mRNA設計引物和探針，將探針與微球共價結合形成的探針微球混合物，與逆轉錄PCR擴增產物雜交，加入鏈霉親和素藻紅蛋白后，可檢測出不同微球的熒光信號，從而確定待檢測樣品中是否含有PCA3、PSA基因以及它們的表達狀況，同時亦可得出PCA3/PSA比值。本發明所述的方法及試劑盒具有高靈敏度、高通量性、檢測快速、準確等優點，能夠對不同程度的前列腺疾病包括前列腺癌和良性前列腺增生相關的PCA3、PSA基因同時進行定性和定量檢測，并對前列腺癌進行特異性診斷。

1.一種檢測PCA3基因、PSA基因的診斷試劑盒，其特征在于，包含了共價結合了PCA3
基因的mRNA和/或PSA基因的mRNA特異性探針的微球混合物及結合了β-actin基因探針的
微球、針對PCA3基因的mRNA和/或PSA基因的mRNA的上下游引物及β-actin基因的上下游
引物、鏈霉親和素-藻紅蛋白和質控品；
所述PCA3基因的mRNA和/或PSA基因的mRNA特異性探針，采用如下序列，其中5’端
含氨基修飾：
針對PCA3基因的mRNA：
探針（1）：5’-AminolinkerC12?ATTTCTCACCTCTGTATCATC-3’，如SEQ?ID?NO.1所示；
探針（2）、（3）、（5）、（6）同探針（1），如SEQ?ID?NO.1所示；
探針（4）：5’-Aminol?inkerC12CTCACCTCTGTATCATCAG-3’，如SEQ?ID?NO.2所示；
探針（7）：5’-AminolinkerC12?ATCTCTGTGCTTCCTTTTGT-3’，如SEQ?ID?NO.3所示；
探針（8）同探針（7），如SEQ?ID?NO.3所示；
探針（9）：5’-AminolinkerC12?CAAATCTGTAATCCCGTTCA-3’，如SEQ?ID?NO.4所示；
探針（10）：5’-AminolinkerC12TATGTGTCAAGAGGAGAGCC-3’，如SEQ?ID?NO.5所示；
或者與上述序列的堿基互補序列；
或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合；
針對PSA基因的mRNA：
探針A：5’-Aminol?inkerC12CAGAATCACCCGAGCAGGTG-3’，如SEQ?ID?NO.6所示；
探針B：5’-AminolinkerC12GGGGTCAAGAACTCCTCTGG-3’，如SEQ?ID?NO.7所示；
探針C：5’-AminolinkerC12CACGCTTTTGTTCCTGATGC-3’，如SEQ?ID?NO.8所示；
探針D同探針A，如SEQ?ID?NO.6所示；
探針E同探針B，如SEQ?ID?NO.7所示；
或者與上述序列的堿基互補序列；
或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合；
所述針對PCA3基因的mRNA和/或PSA基因的mRNA的上下游引物，采用如下序列，其中
上游引物5’端含生物素標簽；
針對PCA3基因的mRNA：
引物組（1）：上游5’-biotin?AAGAAATAGCAAGTGCCGAGAAG-3’，如SEQ?ID?NO.9所示；
下游5’-GTGTGGCCTCAGATGGTAAAGTC-3’，如SEQ?ID?NO.10所示；
引物組（2）：上游5’-biotinTGGTGGGAAGGACCTGATGATAC-3’，如SEQ?ID?NO.11所示；
下游5’-TCTCCCAGGGATCTCTGTGCTT-3’，如SEQ?ID?NO.12所示；
引物組（3）：上游5’-biotin?GGTGGGAAGGACCTGATGATAC-3’，如SEQ?ID?NO.13所示；
下游5’-TAAAGGGGCTGGAAATGTGC-3’，如SEQ?ID?NO.14所示；
引物組（4）：上游5’-biotin?AGCCGAGGGAGACCAGGAAG-3’，如SEQ?ID?NO.15所示；
下游5’-CAGCAGATGTGTGGCCTCAGAT-3’，如SEQ?ID?NO.16所示；
引物組（5）：上游5’-biotin?CCGAGGGAGACCAGGAAGAT-3’，如SEQ?ID?NO.17所示；
下游5’-CACAGGGCGAGGCTCATC-3’，如SEQ?ID?NO.18所示；
引物組（6）：上游5’-biotin?AGAAATAGCAAGTGCCGAGAAGC-3’，如SEQ?ID?NO.19所示；
下游5’-CACAGGGCGAGGCTCATC-3’，如SEQ?ID?NO.20所示；
引物組（7）：上游5’-biotin?TATCCACACACACAGGAAGCAC-3’，如SEQ?ID?NO.21所示；
下游5’-CCTCTCATTGGTAATGCTCACTTT-3’，如SEQ?ID?NO.22所示；
引物組（8）：上游5’-biotin?AAGGCTGCTGACTTTACCATCTG-3’，如SEQ?ID?NO.23所示；
下游5’-TCTAATGTCCTTCCCTCACAAGC-3’，如SEQ?ID?NO.24所示；
引物組（9）：上游5’-biotin?CGCTTGTGAGGGAAGGACATTAG-3’，如SEQ?ID?NO.25所示；
下游5’-GTGAAGCCATCAAGATTTTCTCGTC-3’，如SEQ?ID?NO.26所示；
引物組（10）：上游5’-biotin?CAGCAGGACCCAACGCAT-3’，如SEQ?ID?NO.27所示；
下游5’-GAGAGAGGATTGGTAAGCGATGTG-3’，如SEQ?ID?NO.28所示；
或者與上述序列的堿基互補序列；
或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合；
針對PSA基因的mRNA：
引物組A：上游5’-biotin?TTGACCCCAAAGAAACTTCAGTGT-3’，如SEQ?ID?NO.29所示；
下游5’-TGCCCCATGACGTGATACCT-3’，如SEQ?ID?NO.30所示；
引物組B：上游5’-biotin?TCCCACACCCGCTCTACGAT-3’，如SEQ?ID?NO.31所示；
下游5’-CGTCCAGCACACAGCATGAACT-3’，如SEQ?ID?NO.32所示；
引物組C：上游5’-biotin?TGCACCCCTCATCCTGTCTC-3’，如SEQ?ID?NO.33所示；
下游5’-GCTGTGGCTGACCTGAAATACC-3’，如SEQ?ID?NO.34所示；
引物組D：上游5’-biotin?GGCAGCATTGAACCAGAGGAGT-3’，如SEQ?ID?NO.35所示；
下游5’-CGATGGTGTCCTTGATCCACTT-3’，如SEQ?ID?NO.36所示；
引物組E：上游5’-biotin?TCCTCAGGCCAGGTGATGACT-3’，如SEQ?ID?NO.37所示；
下游5’-CGTCCAGCACACAGCATGAACT-3’，如SEQ?ID?NO.38所示；
或者與上述序列的堿基互補序列；
或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合；
以上針對PCA3基因所設計的引物組（1）、（2）、（3）、（4）、（5）、（6）、（7）、
（8）、（9）、（10）與PCA3探針（1）、（2）、（3）、（4）、（5）、（6）、（7）、
（8）、（9）、（10）一一對應；
以上針對PSA基因所設計的引物組A、B、C、D、E與PSA探針A、B、C、D、E一一對應；
所述β-actin基因，其引物和探針序列如下：
上游引物：5’-biotin?TGGGTCAGAAGGATTCCTATGTG-3’，如SEQ?ID?NO.39所示；
下游引物：5’-GCTGGGGTGTTGAAGGTCTC-3’，如SEQ?ID?NO.40所示；
探針：5’-Aminol?inkerC12TCATTGTAGAAGGTGTGGTG-3’，如SEQ?ID?NO.41所示；
或者與上述序列的堿基互補序列。
2.如權利要求1所述的檢測PCA3基因、PSA基因的診斷試劑盒，其特征在于，所述的微
球混合物，根據不同檢測樣品的需要自由組合。
3.如權利要求1所述的檢測PCA3基因、PSA基因的診斷試劑盒，其特征在于，所述的質
控品包含陽性對照和陰性對照，其中陽性對照為含有PCA3基因和/或PSA基因質粒的混合液，
包括含β-actin基因的質粒；陰性對照為不含有PCA3基因、PSA基因及β-actin基因的質
粒溶液。