本發明公開了復制耐受型的西門利克森林病毒的亞克隆及制備方法和應用，其亞克隆的序列為SEQ ID NO.31所示。復制耐受型的西門利克森林病毒的亞克隆的制備方法包括（1）制備依賴啟動子但無需體外轉錄的高效復制子系統，（2）制備缺失病毒衣殼蛋白基因的亞克隆。利用該亞克隆制備出的復制耐受型的病毒樣顆粒，可用于蛋白表達、基因治療、神經細胞精細形態的描繪、神經環路的解析、神經環路稀疏標記、病毒抗原表位分析、病毒抗體藥物篩選、疫苗、診斷試劑、動物模型的建立或病毒復制與致病機制研究。

1.復制耐受型的西門利克森林病毒的亞克隆，其序列為SEQ ID NO:31。
2.權利要求1所述亞克隆的制備方法，包括：
1)構建Ubc啟動子驅動的西門利克森林病毒復制子：
使用PvuI和EcoRV酶切pSFV-replicon，然后采用Vazyme同源重組試劑盒將SEQ ID NO:
1，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7片段插入到pSFV-replicon，將重組產物轉化感受態HB101，
PCR鑒定為陽性的克隆進行培養并抽提質粒進行測序，測序正確的克隆命名為Ubc-SFV-
replicon；
2)構建攜帶EGFP基因的西門利克森林病毒復制子：
使用BamHI和XhoI酶切Ubc-SFV-replicon，然后采用Vazyme同源重組試劑盒將SEQ ID
NO:10片段插入到以SFV復制子質粒Ubc-SFV-replicon，將重組產物轉化感受態HB101，PCR
鑒定為陽性的克隆進行培養并抽提質粒進行測序，測序正確的克隆命名為Ubc-SFV-rep
licon-EGFP；
3)構建高效表達EGFP的西門利克森林病毒復制子
使用ApaI和NruI酶切Ubc-SFV-replicon-EGFP，然后采用Vazyme同源重組試劑盒將SEQ
ID NO:13和SEQ ID NO:18片段插入到Ubc-SFV-replicon-EGFP，將重組產物轉化感受態
HB101，PCR鑒定為陽性的克隆進行培養并抽提質粒進行測序，測序正確的克隆命名為Ubc-
SFV-replicon-EGFP-hdvr-BGHpA；
4)制備缺失病毒衣殼蛋白基因且攜帶EGFP基因的西門利克森林病毒的亞克隆
使用ApaI和NruI酶切Ubc-SFV-replicon-EGFP-hdvr-BGHpA，然后采用Vazyme同源重組
試劑盒將片段SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:28插入到Ubc-
SFV-replicon-EGFP-hdvr-BGHpA，將重組產物轉化感受態HB101，PCR鑒定為陽性的克隆進
行培養并抽提質粒進行測序，測序正確的克隆命名為Ubc-SFV-FL-EGFP-△C，其序列為SEQ
ID NO:31所示。
3.權利要求1所述的的亞克隆在制備復制耐受型西門利克森林病毒病毒樣顆粒中的應
用。
4.利用權利要求1所述的亞克隆制備的復制耐受型西門利克森林病毒病毒樣顆粒。
5.權利要求4所述的病毒樣顆粒的應用；
所述的應用為制備神經細胞精細形態的描繪的制劑、制備神經環路的解析的制劑、制
備神經環路稀疏標記的制劑、制備病毒抗原表位分析的制劑、病毒抗體藥物篩選、制備疫
苗、制備診斷試劑、動物模型的建立或病毒復制中的應用。
6.權利要求4所述的病毒樣顆粒的應用；所述的應用為在制備基因治療藥物或是制備
致病機制研究藥物中的應用。