一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒及反銷化細菌篩選鑒定方法，試劑盒包括反硝化鑒定預制管；菌株富集管；菌種保藏液；篩選鑒定方法是將待檢測菌株經菌株富集管富集后接種到反硝化鑒定預制管培養，同時用菌株保藏液將富集菌液保存；反硝化鑒定管經靜止培養后，根據培養基顏色變化和產氣情況判斷菌種反硝化能力。本發明的優點是實現反硝化細菌便捷、定量的鑒定效果，實現菌株培養、鑒定、保藏一站式操作。

1.一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，它是由菌株富集管、反硝化鑒定預制
管、菌株保藏液組成；其中:
菌株富集管：
菌株富集管為裝有富集培養基的螺口凍存管，其中每升富集培養基所含成分
如下：牛肉膏1-3g，蛋白胨1-3g，葡萄糖0.8-2.1g，磷酸二氫鉀480-890mg，
磷酸氫二鈉0.7-1.5g，硫酸鎂100-200mg，氯化鈣20-50mg，碳酸氫鈉20-120mg，
微量元素母液A1ml，微量元素母液B1ml，以上培養基用濃度5％的碳酸鈉和HCl
調pH至7.00-7.50；富集培養基配制完成并調完pH后，將富集培養基分裝到
1.8ml螺口凍存管中，每支凍存管加入富集培養基1ml，分裝完畢后，115℃滅菌
25-30min；
反硝化鑒定預制管：
反硝化鑒定預制管中裝有反硝化鑒定培養基，每升反硝化鑒定培養基所含成
分如下：牛肉膏0.1-0.5g，蛋白胨0.1-0.5g，琥珀酸鈉1-3g，醋酸鈉0.1-0.8g，
磷酸二氫鉀480-890mg，磷酸氫二鈉0.5-1.5g，硫酸鎂100-200mg，氯化鈣5-50mg，
EDTA二鈉10-100mg，硝酸鉀1-2g，亞硝酸鈉0.1-1g，1％溴百里酚藍乙醇溶液
1ml，微量元素母液A1ml，微量元素母液B1ml，以上培養基用濃度10％的氫氧
化鈉和HCl調pH至7.00-7.50；反硝化鑒定培養基配制完成并調完pH后，將反
硝化鑒定培養基分裝到反硝化鑒定預制管中，115℃滅菌25-30min；
菌株保藏液：
菌株保藏液成分如下：甘油40-60ml，去離子水40-60ml，115℃滅菌
25-30min；
其中：
每升微量元素母液A所含成分如下：硫酸亞鐵5g，EDTA二鈉5g；
其中：
每升微量元素母液B所含成分如下：EDTA二鈉1.5g，ZnSO₄.7H₂O430mg，
CoCl₂.6H₂O240mg，MnCl₂629mg，CuSO₄.5H₂O250mg，Na₂MoO₄.2H₂O220mg，
NiCl₂.6H₂O190mg，H₃BO₃14mg；其特征在于：所述的反硝化鑒定預制管，包括
鑒定管主體、氣體收集管、支撐桿、密封蓋和接種針頭；所述的鑒定管主體的頂
部設有頂部管口，頂部管口與氣體收集管連接，所述的支撐桿自氣體收集管的頂
部插裝于氣體收集管內，支撐桿的底部與氣體收集管的底部活動連接，鑒定管主
體的底部設有底部管口，底部管口上安裝密封蓋，接種針頭的末端設有連接帽，
與鑒定管主體底部管口連接。
2.如權利要求1所述的一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：所
述的支撐桿的底部設有密封外螺紋，與氣體收集管底部設置的密封內螺紋旋接。
3.如權利要求1所述的一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：所
述的氣體收集管上設有刻度。
4.如權利要求1所述的一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：所
述的支撐桿的底部密封外螺紋上方套裝密封橡膠墊。
5.如權利要求1所述的一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：所
述的支撐桿的頂部設有旋轉手柄。
6.如權利要求1所述的一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：所
述的鑒定管主體與氣體收集管為一體結構。
7.如權利要求1所述的一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：所
述的鑒定管主體、氣體收集管、支撐桿和接種針頭為PP或PE材料。
8.一種采用權利要求1所述的反硝化細菌篩選鑒定試劑盒進行反硝化細菌
篩選鑒定的方法，其特征在于：按如下的步驟進行：
步驟1：菌株富集
將待測菌樣接種到菌株富集管中，將菌株富集管蓋擰緊，培養條件選擇
28-35℃溫度下靜止培養24-48小時，或將菌株富集管平放入搖床28-35℃、
150-200rpm震蕩培養24-48小時；
步驟2：鑒定培養
將步驟1富集的菌株接種至反硝化鑒定預制管中，接種完畢后，在25-35℃
條件下靜止培養；
步驟3：菌種保藏
向菌株富集管中殘留的菌液中加入0.5ml菌株保藏液，震蕩混勻，放入-20℃
冰箱保存；
步驟4：結果觀察
步驟2的反硝化鑒定預制管中的菌株經培養12-48h后，記錄管中培養基的
顏色變化和產氣量，此后，根據實驗需要，每隔一段時間連續記錄觀察結果，培
養基顏色由綠色變成藍色并且有氣體產生，為反硝化陽性細菌。