1.一種肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒,其特征在于,所述的肺炎克雷伯氏菌
檢測試劑盒包括以肺炎克雷伯氏菌的oppA基因為靶基因、基于環介導恒溫擴增
技術設計的兩對引物:內引物FIP/BIP和外引物F3/B3,所述的兩對引物為
外引物F3(1):
TACGCCCCGGTCTGAC
外引物B3(1):
GCGCTTTCACCCCCAAC
內引物FIP(1):
GGCGAGACCAGTCGTTGCCATTTTCGACGGCACGGCCATT
內引物BIP(1):
AACAGCCTCCCCCTACGCGATTTTGTCCCTTTTGCCCGAGG
或
外引物F3(2):
TACGCCCCGGTCTGAC
外引物B3(2):
GCGCTTTCACCCCCAAC
內引物FIP(2):
GGCGAGACCAGTCGTTGCCACGACGGCACGGCCATT
內引物BIP(2):
AACAGCCTCCCCCTACGCGAGTCCCTTTTGCCCGAGG
或
外引物F3(3):
GCCATTACAGCGCAGGAT
外引物B3(3):
TGCAGCGTGGTGTCGT
內引物FIP(3):
GGTAGCTCGCGTAGGGGGATTTTCGTCTGGAGCTGGCAACG
內引物BIP(3):
CATATCGCCAACGCCCGCGTTTTGCGCTTTCACCCCCAAC
或
外引物F3(4):
GCCATTACAGCGCAGGAT
外引物B3(4):
TGCAGCGTGGTGTCGT
內引物FIP(4):
GGTAGCTCGCGTAGGGGGACGTCTGGAGCTGGCAACG
內引物BIP(4):
CATATCGCCAACGCCCGCGGCGCTTTCACCCCCAAC
或
外引物F3(5):
ACCTTTCATTTACGCCCCG
外引物B3(5):
CGCTTTCACCCCCAACGT
內引物FIP(5):
CGTTGCCAGCTCCAGACGATATTTTGTCTGACCTGGTCCGACG
內引物BIP(5):
AACAGCCTCCCCCTACGCGATTTTGTCCCTTTTGCCCGAGG
或
外引物F3(6):
ACCTTTCATTTACGCCCCG
外引物B3(6):
CGCTTTCACCCCCAACGT
內引物FIP(6):
CGTTGCCAGCTCCAGACGATAGTCTGACCTGGTCCGACG
內引物BIP(6):
AACAGCCTCCCCCTACGCGAGTCCCTTTTGCCCGAGG
或
外引物F3(7):
TGGAGCTGGCAACGACT
外引物B3(7):
GGAAGGCGGCATTCGG
內引物FIP(7):
CGGGCGTTGGCGATATGCATATTTTTGGTCTCGCCGGCAACA
內引物BIP(7):
TGCCCTCGGGCAAAAGGGATTTTCTGGGTCAGAGTGACCTGC
或
外引物F3(8):
TGGAGCTGGCAACGACT
外引物B3(8):
GGAAGGCGGCATTCGG
內引物FIP(8):
CGGGCGTTGGCGATATGCATATGGTCTCGCCGGCAACA
內引物BIP(8):
TGCCCTCGGGCAAAAGGGACTGGGTCAGAGTGACCTGC。
2.根據權利要求1所述的肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒,其特征在于,所述
的肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒還包括Bst?DNA聚合酶、緩沖液、dNTPs、甜菜
堿、硫酸鎂、顯色液、穩定液和陽性對照;
所述的緩沖液含:0.18-0.25mol/L?Tris-HCl,0.10-0.15mol/L?KCl,0.07-0.
15mol/L(NH4)2SO4,15-30mmol/L?MgSO4,1-2體積%TritonX-100;
所述穩定液為石蠟油。
3.根據權利要求2所述的肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒,其特征在于,
所述的Bst?DNA聚合酶:酶濃度7-10U/μL;
所述的dNTPs:每種核苷酸濃度10-20mmol/L;
所述的甜菜堿:濃度3-6mol/L;
所述的硫酸鎂:濃度100-200mmol/L;
所述的顯色液為SYBR?Green?I或Eva?Green;
所述的陽性對照為肺炎克雷伯氏菌基因組DNA。
4.根據權利要求3所述的肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒,其特征在于,
所述的Bst?DNA聚合酶:酶濃度8U/μL;
所述的緩沖液含:0.2mol/L?Tris-HCl,0.1mol/L?KCl,0.1mol/L(NH4)
2SO4,20mmol/L?MgSO4,1體積%?TritonX-100;
所述的dNTPs:每種核苷酸濃度10mmol/L;
所述的甜菜堿:濃度5mol/L;
所述的硫酸鎂:濃度150mmol/L。
5.根據權利要求2、3或4所述的肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒,其特征在
于,所述的肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒還包括反應管,所述的反應管由管體和
管蓋兩部分組成,管體內腔的下部設有將其分隔成A、B兩個空腔的縱向延伸的
隔板。
6.根據權利要求5所述的肺炎克雷伯氏菌檢測試劑盒,其特征在于,所述
的A、B兩個空腔中分別裝有工作液或顯色液,兩個空腔中的液體上層均由穩定
液封存,所述工作液為緩沖液、dNTPs、甜菜堿、硫酸鎂、水和Bst?DNA聚合
酶的混合而成。
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