1.提取基因組DNA的方法,包括以下步驟:
(1)采樣;
(2)裂解樣品細胞:加入65℃預熱的試劑1和Proteinase K,渦旋振蕩,混合均勻,65℃
水浴0.5h-過夜;
(3)沉淀非DNA的雜質:將步驟2中的混合物冷卻至室溫,加入試劑2,混合均勻,冰浴;
(4)離心步驟3所得混合物,取上清,加入Carrier RNA和試劑3,混合均勻后加入異丙
醇,混勻;
(5)將步驟4所得混合物中的DNA與純化載體結合,經過洗滌液的去蛋白洗滌和去鹽洗
滌,以及洗脫液的洗脫步驟,獲得可用于檢測的樣本基因組DNA;
其中,所述的試劑1包括以下組分:0.1%-5%的十六烷基三甲基溴化銨(質量百分比)、
10mM-200mM的Tris、10mM-200mM EDTA、0.1%-10%的PVP(質量百分比)、0.1M-5M的NaCl、溶
劑為去離子水;試劑2包括以下組分:0.1M-6.5M的鹽酸胍、1%-50%的乙醇(體積百分比)、
0.1M-2M的檸檬酸鈉、溶劑為去離子水;試劑3包括以下組分:0.1M-8M的鹽酸胍、0.05M-0.2M
的甘氨酸、溶劑為去離子水。
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,其中步驟4所述的純化載體選自核酸提取
純化柱或磁珠。
3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟2中65℃水浴時間為0.5h-2h。
4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟3冰浴時間為10min。
5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,試劑1的pH值為4.5-8.5,試劑2的pH值為
3.3-7.5,試劑3的pH值為2.5-8.0。
6.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述的試劑1包括以下組分:3.5%的十六
烷基三甲基溴化銨、120mM的Tris、110mM的EDTA、6%的PVP、3M的NaCl、溶劑為去離子水;試
劑2包括以下組分:2.5M的鹽酸胍、25%的乙醇、1M的檸檬酸鈉、溶劑為去離子水;試劑3包括
以下組分:4M的鹽酸胍、0.1M的甘氨酸、溶劑為去離子水。
7.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述的洗滌液包括去蛋白洗滌液和去鹽洗
滌液。
8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述去蛋白洗滌液包括1M-6M的鹽酸胍,
1mM-50mM的EDTA·2Na·2H2O,溶劑為去離子水;所述去鹽洗滌液包括20mM-200mM的NaAC·
3H2O,溶劑為去離子水;洗脫液為去離子水。
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