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提取基因組DNA的試劑盒和提取方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-14
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201510072951.4 
  • 技術(專利)名稱 提取基因組DNA的試劑盒和提取方法 
  • 項目單位 杭州百邁生物股份有限公司
  • 發明人 林源吉,丁佳女,葉俊波,洪巧娟 
  • 行業類別 智慧健康-物聯網
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 陳遠軍
  • 發布時間 2022-01-14  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了提取基因組DNA的試劑盒和方法,所述試劑盒包括試劑1、試劑2和試劑3。所述試劑1包括十六烷基三甲基溴化銨、Tris、EDTA、PVP、NaCl;試劑2包括鹽酸胍、乙醇、檸檬酸鈉;試劑3包括鹽酸胍、甘氨酸。本發明所述試劑盒增強了所提取基因組DNA的純度和完整性,提高產物得率。所用試劑無毒無害,保證操作人員的健康,減少環境的污染。本發明所述方法可提取微量樣本中的基因組DNA,實現了被檢測的物體的無損傷取樣,且提取方法簡單,提取時間短,提高了提取效率。
    展開
  • 02

    說明書

    1.提取基因組DNA的方法,包括以下步驟:
    (1)采樣;
    (2)裂解樣品細胞:加入65℃預熱的試劑1和Proteinase K,渦旋振蕩,混合均勻,65℃
    水浴0.5h-過夜;
    (3)沉淀非DNA的雜質:將步驟2中的混合物冷卻至室溫,加入試劑2,混合均勻,冰浴;
    (4)離心步驟3所得混合物,取上清,加入Carrier RNA和試劑3,混合均勻后加入異丙
    醇,混勻;
    (5)將步驟4所得混合物中的DNA與純化載體結合,經過洗滌液的去蛋白洗滌和去鹽洗
    滌,以及洗脫液的洗脫步驟,獲得可用于檢測的樣本基因組DNA;
    其中,所述的試劑1包括以下組分:0.1%-5%的十六烷基三甲基溴化銨(質量百分比)、
    10mM-200mM的Tris、10mM-200mM EDTA、0.1%-10%的PVP(質量百分比)、0.1M-5M的NaCl、溶
    劑為去離子水;試劑2包括以下組分:0.1M-6.5M的鹽酸胍、1%-50%的乙醇(體積百分比)、
    0.1M-2M的檸檬酸鈉、溶劑為去離子水;試劑3包括以下組分:0.1M-8M的鹽酸胍、0.05M-0.2M
    的甘氨酸、溶劑為去離子水。
    2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,其中步驟4所述的純化載體選自核酸提取
    純化柱或磁珠。
    3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟2中65℃水浴時間為0.5h-2h。
    4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,在步驟3冰浴時間為10min。
    5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,試劑1的pH值為4.5-8.5,試劑2的pH值為
    3.3-7.5,試劑3的pH值為2.5-8.0。
    6.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述的試劑1包括以下組分:3.5%的十六
    烷基三甲基溴化銨、120mM的Tris、110mM的EDTA、6%的PVP、3M的NaCl、溶劑為去離子水;試
    劑2包括以下組分:2.5M的鹽酸胍、25%的乙醇、1M的檸檬酸鈉、溶劑為去離子水;試劑3包括
    以下組分:4M的鹽酸胍、0.1M的甘氨酸、溶劑為去離子水。
    7.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述的洗滌液包括去蛋白洗滌液和去鹽洗
    滌液。
    8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述去蛋白洗滌液包括1M-6M的鹽酸胍,
    1mM-50mM的EDTA·2Na·2H2O,溶劑為去離子水;所述去鹽洗滌液包括20mM-200mM的NaAC·
    3H2O,溶劑為去離子水;洗脫液為去離子水。
    展開

專利技術附圖

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