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尼帕病毒檢測試劑盒及其專用引物

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-28
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201811019393.5 
  • 技術(專利)名稱 尼帕病毒檢測試劑盒及其專用引物 
  • 項目單位 中國科學院武漢病毒研究所
  • 發明人 劉翟,陳全姣,馬莉萍 
  • 行業類別 健康產品質檢-出入境檢驗
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭先運
  • 發布時間 2022-01-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了尼帕病毒檢測試劑盒及其專用引物。該引物用于對尼帕病毒進行RT?LAMP檢測或對尼帕病毒基因組cDNA進行LAMP檢測,其根據尼帕病毒特異性的保守靶序列設計,尼帕病毒特異性的保守靶序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。使用本發明的引物或檢測試劑盒,可以在等溫條件下快速、方便、高效、高特異性、高靈敏度地檢測到尼帕病毒,不需要復雜儀器,可應用于對尼帕病毒基因組RNA進行RT?LAMP檢測。
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  • 02

    說明書

    1.一種引物,用于對尼帕病毒進行RT-LAMP檢測或對尼帕病毒基因組cDNA進行LAMP檢測,其特征在于,其根據尼帕病毒特異性的保守靶序列設計,所述尼帕病毒特異性的保守靶序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示;所述引物為六條引物,所述六條引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。2.一種檢測試劑盒,用于對尼帕病毒進行RT-LAMP檢測或對尼帕病毒基因組cDNA進行LAMP檢測,其包含權利要求1所述的引物。3.根據權利要求2所述的檢測試劑盒,其特征在于,所述檢測試劑盒包含以下用于25μl檢測體系的試劑:20.0mM Tris-HCl,10.0mM KCl,8.0mM MgSO4,10.0mM(NH4)2SO4,0.1%Triton X-100,0.8mM甜菜堿,dNTP每種1.4mM,8U Bst DNA聚合酶,模板為RNA時添加7.5UWarmStart RTx逆轉錄酶,引物加入量為:SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示引物各4pmol,SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示引物各32pmol,SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示引物各15pmol。4.權利要求1所述的引物或權利要求2或3所述的檢測試劑盒在制備尼帕病毒的RT-LAMP檢測試劑或尼帕病毒基因組cDNA的LAMP檢測試劑中的應用。5.根據權利要求4所述的應用,所述試劑用于尼帕病毒的RT-LAMP檢測中,檢測方法包括以下步驟:1)以待測樣品的基因組RNA為模板,在權利要求1所述引物的引導下或使用權利要求2或3所述的檢測試劑盒進行RT-LAMP擴增;2)反應結束后進行結果判定:在反應液中添加鈣黃綠素指示劑的情況下,根據反應液的顏色變化判斷結果,綠色表示所述待測樣品中存在尼帕病毒,橙色表示所述待測樣品中不存在尼帕病毒;或者不添加鈣黃綠素指示劑的情況下,直接用濁度儀檢測反應前后反應液的濁度變化來判斷結果,濁度上升表示所述待測樣品中存在尼帕病毒,濁度無變化表示所述待測樣品中不存在尼帕病毒。6.根據權利要求5所述的應用,其特征在于:所述步驟1)中使用25μl RT-LAMP反應體系,其包含:待測樣品的基因組RNA 2μl,20.0mM Tris-HCl,10.0mM KCl,8.0mM MgSO4,10.0mM(NH4)2SO4,0.1%Triton X-100,0.8mM甜菜堿,dNTP每種1.4mM,8U Bst DNA聚合酶,7.5U WarmStart RTx逆轉錄酶,引物加入量為:SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示引物各4pmol,SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示引物各32pmol,SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示引物各15pmol。7.根據權利要求5所述的應用,其特征在于:所述步驟1)中的RT-LAMP擴增條件為:置65℃恒溫45-50min。8.根據權利要求7所述的應用,其特征在于:所述步驟1)中的RT-LAMP擴增條件為:置65℃恒溫46min。9.根據權利要求5至8中任一項所述的應用,其特征在于:所述步驟2)中鈣黃綠素指示劑的添加量為1μl。
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專利技術附圖

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