本發(fā)明屬于流行病學(xué)和衛(wèi)生檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種快速檢測(cè)馬鏈球菌獸疫亞種的PCR快速檢測(cè)試劑盒及方法。具體而言，本發(fā)明所述試劑盒包括三對(duì)引物，分別特異性地針對(duì)類M蛋白(SzP)、纖聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白(Fnz)超氧化物歧化酶A(SodA)編碼基因，可同時(shí)針對(duì)馬鏈球菌獸疫亞種的三種毒力因子SzP、Fnz和SodA進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明所述的多重PCR檢測(cè)方法快速簡(jiǎn)便，可直接對(duì)病料檢測(cè)，避免了常規(guī)細(xì)菌分離、培養(yǎng)和生化鑒定的復(fù)雜過程，縮短了檢測(cè)時(shí)間，且操作方便，簡(jiǎn)單培訓(xùn)即能熟練使用。敏感性高，能檢測(cè)出微量的病原。特異性強(qiáng)，能將馬鏈球菌獸疫亞種和其它種類的鏈球菌區(qū)別開來，且無任何交叉反應(yīng)。

1.一種用于檢測(cè)馬鏈球菌獸疫亞種(Streptococcus?equi?subsp.zooepidemicus)的多重PCR檢測(cè)試劑，該試劑包括分別特異性地針對(duì)馬鏈球菌獸疫亞種的類M蛋白(SzP)、纖聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白(Fnz)和超氧化物歧化酶A(SodA)編碼基因的三對(duì)引物，其中所述的特異性地針對(duì)類M蛋白編碼基因的引物對(duì)的核苷酸序列為：正向引物：5’CTA?TCG?GTG?GTC?GTA?ATG?GAG?A3’反向引物：5’ACC?TGC?CAT?AAC?TGC?AAG?AGC?T3’其中所述的特異性地針對(duì)纖聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白編碼基因的引物對(duì)的核苷酸序列為：正向引物：5’GAG?GTG?GAC?CAG?CTT?CAC?CT?3’反向引物：5’GAG?GAA?AGA?CGG?TCC?AGA?CG?3’其中所述的特異性地針對(duì)超氧化物歧化酶A編碼基因的引物對(duì)的核苷酸序列為：正向引物：5’CAG?CAT?TCC?TGC?TGA?CAT?TCG?TCA?GG?3’反向引物：5’CTG?ACC?AGC?CTT?ATT?CAC?AAC?CAG?CC?3’。2.權(quán)利要求1所述的多重PCR檢測(cè)試劑，其中所述的三對(duì)引物可以預(yù)先混合在一起，也可以獨(dú)立存在于所述檢測(cè)試劑中，使用時(shí)現(xiàn)用現(xiàn)配。3.一種檢測(cè)馬鏈球菌獸疫亞種的非診斷性多重PCR檢測(cè)方法，該方法包括下列步驟：1)使用權(quán)利要求1或2所述的三對(duì)引物，與PCR擴(kuò)增用的dNTP、MgCl₂、PCR緩沖液及聚合酶混合，得到檢測(cè)預(yù)混液；2)向上述檢測(cè)預(yù)混液中加入待檢菌液或從待檢組織提取的基因組DNA作為模板；3)將步驟2)中建立的擴(kuò)增反應(yīng)體系置于PCR儀上，按照預(yù)定擴(kuò)增條件進(jìn)行擴(kuò)增；4)觀察是否有目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)，其中所述的目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)是指，當(dāng)電泳檢測(cè)時(shí)，同時(shí)出現(xiàn)750bp、540bp和230bp三個(gè)條帶。4.權(quán)利要求3所述的檢測(cè)馬鏈球菌獸疫亞種的非診斷性多重PCR檢測(cè)方法，其中所述的擴(kuò)增條件為：94℃變性4min；然后進(jìn)入循環(huán)，94℃?30s，55℃?30s，72℃?30s，共進(jìn)行25個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。5.權(quán)利要求3所述的檢測(cè)馬鏈球菌獸疫亞種的非診斷性多重PCR檢測(cè)方法，其中所述的電泳為瓊脂糖凝膠電泳或SDS-PAGE電泳。