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一種臨床檢測EGFR基因突變的HRM方法及試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-09
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201410057912.2 
  • 技術(專利)名稱 一種臨床檢測EGFR基因突變的HRM方法及試劑盒 
  • 項目單位 武漢大學
  • 發明人 劉松梅,黃景濤 
  • 行業類別 智慧健康-物聯網
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 楊盛敏
  • 發布時間 2021-10-09  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種用于臨床檢測EGFR基因突變的HRM方法及試劑盒。通過提取待測樣本DNA,使用如SEQ ID NO.1-30所示的引物進行PCR擴增和HRM掃描分析;根據掃描分析結果判斷EGFR基因突變類型,若HRM掃描無分型樣本為陰性,HRM掃描分型樣本為陽性。本發明的試劑盒包含上述引物、陰性對照、陽性對照、PCR試劑和LC GREEN等。該試劑盒全部引物能在同一溫度下進行PCR反應,檢測靈敏度高,特異性強,反應體系小,檢測樣本來源豐富,反應簡便迅速試劑價格低廉,高通量。本發明檢測全過程操作簡單、省時、成本低,適用于臨床腫瘤患者EGFR基因突變的快速檢測,有助于指導臨床個體化用藥。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種基于HRM技術的EGFR基因突變檢測PCR試劑盒,其特征在于:包含引物對A、
    B、C、D和/或E;
    其中,引物對A用于檢測EGFR基因18號外顯子G719X突變,其為以下三對序列中的
    一對:
    A_F1:CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT,
    A_R1:CCTTATACACCGTGCCGA;或
    A_F2:CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTG,
    A_R2:GTCCCTTATACACCGTGCC;或
    A_F3:CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT,
    A_R3:CTTATACACCGTGCCGAAC;
    引物對B用于檢測EGFR基因19號外顯子缺失突變:E746_A750del、E746_T751>I、
    E746_T751del、E746_S752>A、E746_S752>V、E746_S752>D、E746_T751>A、L747_A750>P、
    L747_T751>Q、L747_E749del、L747_T751del、L747_S752del、L747_A750>P、L747_T751>S、
    L747_T751del、L747_T751>P,其為以下三對序列中的一對:
    B_F1:AAGTTAAAATTCCCGTCGCTA,
    B_R1:TTCCTTGTTGGCTTTCGG;或
    B_F2:GTTAAAATTCCCGTCGCTATCA,
    B_R2:TTCCTTGTTGGCTTTCGG;或
    B_F3:AAATTCCCGTCGCTATCAAG,
    B_R3:AGGATTTCCTTGTTGGCT;
    引物對C用于檢測EGFR基因20號外顯子S768I突變,其為以下三對序列中的一對:
    C_F1:AGGAAGCCTACGTGATGG,
    C_R1:GTGGAGGTGAGGCAGAT;或
    C_F2:AGGAAGCCTACGTGATGG,
    C_R2:GGTGGAGGTGAGGCAGA;或
    C_F3:AGGAAGCCTACGTGATGG,
    C_R3:TGGAGGTGAGGCAGATG;
    引物對D用于檢測EGFR基因20號外顯子T790M突變,其為以下三對序列中的一對:
    D_F1:CACCGTGCAGCTCATCA,
    D_R1:GGACATAGTCCAGGAGGC;或
    D_F2:CACCGTGCAGCTCATCA,
    D_R2:CCGGACATAGTCCAGGAG;或
    D_F3:CACCGTGCAGCTCATCA,
    D_R3:CGGACATAGTCCAGGAGG;
    引物對E用于檢測EGFR基因21號外顯子L858R、L861Q突變,其為以下三對序列中
    的一對:
    E_F1:AGCATGTCAAGATCACAGATTT,
    E_R1:TGGTATTCTTTCTCTTCCGCAC;或
    E_F2:GCAGCATGTCAAGATCACAG,
    E_R2:TTCTTTCTCTTCCGCACCC;或
    E_F3:AAACACCGCAGCATGTC,
    E_R3:TTCTTTCTCTTCCGCACCC。
    2.根據權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:包含EGFR突變陰性對照和陽性對照。
    3.根據權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:包含PCR試劑和飽和熒光染料。
    4.權利要求1-3任一項所述的試劑盒的使用方法,其特征在于包括如下步驟:提取待測
    樣本DNA;配制包含待測樣本DNA、引物對、PCR試劑和飽和熒光染料的PCR反應體系進
    行PCR擴增;對PCR產物進行HRM分析掃描;該使用方法不用于疾病的診斷。
    5.根據權利要求4所述的使用方法,其特征在于:所述的PCR反應體系為:Taq?buffer?1μL,
    dNTPs?1μL,Taq?1μL,上游引物0.5μL,下游引物0.5μL,LC?GREEN?1μL,MgCl20.8μL,ddH2O
    3.2μL,DNA?1μL。
    6.根據權利要求4所述的使用方法,其特征在于:所述的PCR擴增條件為:95℃2min;
    95℃15s,61℃15s,72℃15s,45cycles;72℃7min,94℃30s,28℃30s。
    7.根據權利要求4所述的使用方法,其特征在于:所述的HRM分析掃描條件為:95℃
    5s,40℃30s,62℃保溫,67℃~92℃掃描。
    展開

專利技術附圖

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