1.一種基于HRM技術的EGFR基因突變檢測PCR試劑盒,其特征在于:包含引物對A、
B、C、D和/或E;
其中,引物對A用于檢測EGFR基因18號外顯子G719X突變,其為以下三對序列中的
一對:
A_F1:CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT,
A_R1:CCTTATACACCGTGCCGA;或
A_F2:CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTG,
A_R2:GTCCCTTATACACCGTGCC;或
A_F3:CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT,
A_R3:CTTATACACCGTGCCGAAC;
引物對B用于檢測EGFR基因19號外顯子缺失突變:E746_A750del、E746_T751>I、
E746_T751del、E746_S752>A、E746_S752>V、E746_S752>D、E746_T751>A、L747_A750>P、
L747_T751>Q、L747_E749del、L747_T751del、L747_S752del、L747_A750>P、L747_T751>S、
L747_T751del、L747_T751>P,其為以下三對序列中的一對:
B_F1:AAGTTAAAATTCCCGTCGCTA,
B_R1:TTCCTTGTTGGCTTTCGG;或
B_F2:GTTAAAATTCCCGTCGCTATCA,
B_R2:TTCCTTGTTGGCTTTCGG;或
B_F3:AAATTCCCGTCGCTATCAAG,
B_R3:AGGATTTCCTTGTTGGCT;
引物對C用于檢測EGFR基因20號外顯子S768I突變,其為以下三對序列中的一對:
C_F1:AGGAAGCCTACGTGATGG,
C_R1:GTGGAGGTGAGGCAGAT;或
C_F2:AGGAAGCCTACGTGATGG,
C_R2:GGTGGAGGTGAGGCAGA;或
C_F3:AGGAAGCCTACGTGATGG,
C_R3:TGGAGGTGAGGCAGATG;
引物對D用于檢測EGFR基因20號外顯子T790M突變,其為以下三對序列中的一對:
D_F1:CACCGTGCAGCTCATCA,
D_R1:GGACATAGTCCAGGAGGC;或
D_F2:CACCGTGCAGCTCATCA,
D_R2:CCGGACATAGTCCAGGAG;或
D_F3:CACCGTGCAGCTCATCA,
D_R3:CGGACATAGTCCAGGAGG;
引物對E用于檢測EGFR基因21號外顯子L858R、L861Q突變,其為以下三對序列中
的一對:
E_F1:AGCATGTCAAGATCACAGATTT,
E_R1:TGGTATTCTTTCTCTTCCGCAC;或
E_F2:GCAGCATGTCAAGATCACAG,
E_R2:TTCTTTCTCTTCCGCACCC;或
E_F3:AAACACCGCAGCATGTC,
E_R3:TTCTTTCTCTTCCGCACCC。
2.根據權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:包含EGFR突變陰性對照和陽性對照。
3.根據權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:包含PCR試劑和飽和熒光染料。
4.權利要求1-3任一項所述的試劑盒的使用方法,其特征在于包括如下步驟:提取待測
樣本DNA;配制包含待測樣本DNA、引物對、PCR試劑和飽和熒光染料的PCR反應體系進
行PCR擴增;對PCR產物進行HRM分析掃描;該使用方法不用于疾病的診斷。
5.根據權利要求4所述的使用方法,其特征在于:所述的PCR反應體系為:Taq?buffer?1μL,
dNTPs?1μL,Taq?1μL,上游引物0.5μL,下游引物0.5μL,LC?GREEN?1μL,MgCl20.8μL,ddH2O
3.2μL,DNA?1μL。
6.根據權利要求4所述的使用方法,其特征在于:所述的PCR擴增條件為:95℃2min;
95℃15s,61℃15s,72℃15s,45cycles;72℃7min,94℃30s,28℃30s。
7.根據權利要求4所述的使用方法,其特征在于:所述的HRM分析掃描條件為:95℃
5s,40℃30s,62℃保溫,67℃~92℃掃描。
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