本發(fā)明涉及一種利用熒光PCR技術(shù)檢測人白介素28B（IL28B）基因多態(tài)性的試劑盒。它在單個反應(yīng)管中采用3條引物擴(kuò)增rs12979860基因CC型和TT型序列，通過2條不同波長MGB熒光探針檢測該基因的CC型和TT型。試劑盒操作簡便、檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可應(yīng)用于臨床丙型肝炎患者IL28B rs12979860基因多態(tài)性檢測，進(jìn)而預(yù)測抗病毒藥物治療效果。

1.一種單管檢測人白介素28B基因多態(tài)性的熒光PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒
采用3條引物和2條MGB熒光探針檢測該基因rs12979860的CC型和TT型，并且3條引物核苷酸
序列分別為SEQ ID NO：1～3，2條熒光探針核苷酸序列分別為SEQ ID NO：4～5，SEQ ID NO：
4序列探針5’端標(biāo)記FAM熒光基團(tuán)、SEQ ID NO：5序列探針5’端標(biāo)記JOE或HEX或VIC熒光基
團(tuán)，兩條探針3’端均標(biāo)記MGB-NFQ淬滅基團(tuán)。
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，使用的3條引物中有2條上游引物SEQ ID NO：1和SEQ ID
NO：2、1條下游引物SEQ ID NO：3，人白介素28B基因 rs12979860基因單核苷酸突變位點(diǎn)設(shè)
計(jì)在上游引物SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的3’端末尾1～3個核苷酸位置，輔以共有的下游
引物SEQ ID NO：3分別擴(kuò)增CC型和TT型。
3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，使用SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5這2條MGB熒光探針序
列的3’端1～5個核苷酸分別與上游引物SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的3’端序列互補(bǔ)重疊，
對應(yīng)檢測CC型和TT型。
4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，所述熒光PCR反應(yīng)液各成分終濃度為：pH8.3的Tris-HCl
10 mM，KCl 50 mM，dATP、dGTP、dCTP、dUTP各0.2 mM，MgCl₂ 3 mM，3條引物各0.8 μM，2條MGB
熒光探針各0.2 μM，Taq DNA聚合酶2 U，UNG酶0.5 U，提取的模板10μl，總反應(yīng)體積30μl。
5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，所述熒光PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?0℃ 2min、95℃ 10min后按
照95℃ 10sec、62℃ 35sec循環(huán)擴(kuò)增40次，循環(huán)步驟中62℃時采集FAM和JOE波長熒光信號。
6.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其質(zhì)控品包括陰性對照、CC型陽性對照、TT型陽性對照
各1個。