1.一種檢測松材線蟲的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
(1)從待檢測的松樹木材樣品中提取松材線蟲基因組DNA；
(2)以提取的DNA為模板，加入包括LAMP引物組、Bst?DNA聚合
酶在內的組分建立LAMP反應體系，進行環介導等溫擴增；
所述的LAMP引物組由上游外部引物SEQ?ID?NO.13、下游外部引物
SEQ?ID?NO.14、上游內部引物SEQ?ID?NO.15和下游內部引物SEQ?ID?
NO.16組成；
(3)根據擴增產物熒光的有無或濁度的變化，判定待檢測的松樹木材
樣品中是否存在松材線蟲。
2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)采用2-10％
的Chelex-100作為提取緩沖液提取松樹木材樣品中松材線蟲DNA。
3.按照權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(1)采用5％的
Chelex-100作為提取緩沖液提取松樹木材樣品中的松材線蟲DNA。
4.按照權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(1)中先用異硫
氰酸胍提取緩沖液處理松樹木材樣品，再加入2-10％的Chelex-100提取松
樹木材樣品中的松材線蟲DNA。
5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的從
待檢測的松樹木材樣品中提取松材線蟲DNA的方法，包括以下步驟：
(1)向待檢測的松樹木材樣品中加入異硫氰酸胍提取緩沖液攪拌混
勻，冰上放置后，沸水煮3-10min；(2)按w/v計，加入2-10％Chelex-100
攪拌混勻，沸水煮5-15min，離心，取上清液，即得。
6.按照權利要求5所述的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的冰
上放置時間為3-10min，沸水煮的時間為5min；步驟(2)中所述的沸水
煮的時間為8min。
7.按照權利要求6所述的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的冰
上放置時間為5min。
8.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：在所述LAMP引物組
中還含有一條SEQ?ID?NO.33所示的環引物。
9.用于檢測松材線蟲的LAMP引物組，其特征在于：由上游外部引
物SEQ?ID?NO.13、下游外部引物SEQ?ID?NO.14、上游內部引物SEQ?ID?
NO.15和下游內部引物SEQ?ID?NO.16組成。
10.一種檢測松材線蟲的LAMP試劑盒，其特征在于，該試劑盒包
括以下各組分：LAMP引物組，LAMP反應緩沖液，DNA鏈置換酶和熒
光染料；
其中，所述的LAMP引物組由上游外部引物SEQ?ID?NO.13、下游外
部引物SEQ?ID?NO.14、上游內部引物SEQ?ID?NO.15和下游內部引物SEQ?
ID?NO.16組成。
11.按照權利要求10所述的LAMP試劑盒，其特征在于：所述LAMP
引物組中含有一條SEQ?ID?NO.33所示的環引物。
12.權利要求10或11所述LAMP試劑盒在檢測松材線蟲中的應用，
包括：(1)建立LAMP反應體系；(2)將LAMP反應體系在57-63℃的
溫度下水浴60到120min，最后在80℃溫度下溫育3-10min；(3)將LAMP
擴增產物通過濁度儀實時檢測白色沉淀以判別待檢測樣品中是否含有松材
線蟲。
13.按照權利要求12所述的應用，其特征在于：步驟(2)中將所建
立的LAMP反應體系在60℃的溫度下反應60到120min，最后在80℃溫
度下溫育3-10min；其中，所述的LAMP反應體系參照以下方式建立：待
檢測的DNA提取液2μL，上游外部引物和上游內部引物各5pmol，下游內
部引物和下游外部引物各40pmol，環引物20pmol，2×LAMP反應mix
12.5μL，DNA鏈置換酶1μL，熒光染料1μL。
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