本發明涉及一種O139群霍亂弧菌檢測用組合物、試劑盒和檢測方法。該組合物中包含針對產毒型O139群霍亂弧菌O抗原編碼基因rfb-O139和分泌霍亂毒素的致病毒素基因ctxA的特異性引物。本發明的組合物和試劑盒能夠靈敏地檢測出樣品存在的產毒型O139群霍亂弧菌，其檢測下限為1.0×10拷貝每反應體系。對其基因組DNA的檢測敏感度為1.0×10pg每反應體系。

1.一種用于特異性檢測樣品中O139群霍亂弧菌的組合物，其中包括下列
引物：上游引物：5′-TgATgTTgTgggATAAgCAATCTT-3′，
下游引物：5′-CTCAgCAATgCggTggTCTA-3′。
2.如權利要求1所述的組合物，其中進一步包括探針：
5′-熒光基團-AACCCgCCCTTCTAATgAACACgCCA-熒光淬滅基團-3′。
3.如權利要求2所述的組合物，其中所述熒光基團為Tet，所述熒光淬滅
基團為ECLIPSE。
4.如權利要求1所述的組合物，其中進一步包括另一對引物：
上游引物：5′-ATgCCAAgAggACAgAgTgAgT-3′，
下游引物：5′-TCAAACTAATTgAggTggAAACATATCC-3′。
5.如權利要求4所述的組合物，其中進一步包括探針：
5′-熒光基團-AACCCgCCCTTCTAATgAACACgCCA-熒光淬滅基團-3′，
和
5′-熒光基團-TCgTgCCTAACAAATCCCgTCTgAgTTCCT-熒光淬滅基團
-3′，并且在兩個探針中分別使用不同的熒光基團。
6.如權利要求5所述的組合物，其中所述的兩對熒光基團和熒光淬滅基團
為：Tet和ECLIPSE，以及FAM和ECLIPSE。
7.一種用于特異性檢測樣品中O139群霍亂弧菌的試劑盒，其中包括PCR
反應體系，和權利要求1～6中任一項所述的組合物。
8.如權利要求7所述的試劑盒，其中所述PCR反應體系為實時定量PCR
反應體系。
9.一種特異性檢測樣品中O139群霍亂弧菌的方法，包括：
提取樣品中的細菌基因組DNA；
使用權利要求1～6中任一項所述的組合物，或使用權利要求7或8所述的
試劑盒，用PCR法擴增所述細菌基因組DNA；
對PCR反應的結果進行分析，
其中，所述樣品為食品。
10.如權利要求9所述的方法，其中所述PCR法的反應條件為：
95±2℃預變性超過1min，95±2℃變性超過5s，60±2℃延伸超過10s，共
反應超過30個循環，最后在72±2℃下延伸超過2min；或
95±2℃預變性超過1min，95±2℃變性超過5s，60±2℃延伸超過10s，共
反應超過30個循環。