本發明公開了屬于醫學腫瘤學領域的一種利用甲基化原理檢測血液中轉移肝癌細胞的試劑盒、標志物及其檢測方法。該標志物為肝癌細胞特異性表達降低的基因ASS基因或ASL基因，其啟動子區和第一外顯子區包含至少一個被甲基化的CpG島。該試劑盒包括針對ASS基因和ASL基因的各5條特異性專用引物，通過甲基化特異性PCR方法檢測ASS基因和ASL基因甲基化情況，進而推測待檢樣品中是否含有轉移肝癌細胞。該方法具有專一性強，反應靈敏的特點，對于了解并掌握如何早期發現肝癌意義重大。

1.一種利用甲基化原理檢測血液中轉移肝癌細胞的試劑盒，包括dNTP、10
x?PCR?buffer、MgCl₂、ddH₂O，其特征在于，還包括標準血液DNA、熱啟動Taq?DNA
聚合酶、引物F1、引物B1、引物F2、引物B2、引物B3、引物R1、引物L1、引
物R2、引物L2、引物L3；上述引物用于做甲基化特異性PCR，PCR時，引物的配
對方案為：
引物F1、B1配對，引物F1、B2配對，引物F2、B1配對，引物F2、B3配
對，用于檢測精氨酸代琥珀酸合成酶基因甲基化情況；
引物R1、L1配對，引物R1、L2配對，引物R2、L3配對，用于檢測ASL
精氨酸代琥珀酸裂解酶基因甲基化情況；
所述標準血液DNA為取自無肝癌健康人血液提取的基因組DNA并經過重
亞硫酸鹽處理；
所述引物F1為序列表中SEQ?ID?No.6所示的核苷酸序列，引物B1為序列表中
SEQ?ID?No.7所示的核苷酸序列，引物F2為序列表中SEQ?ID?No.8所示的核苷酸
序列，引物B2為序列表中SEQ?ID?No.9所示的核苷酸序列，引物B3為序列表中SEQ?
ID?No.10所示的核苷酸序列，引物R1為序列表中SEQ?ID?No.11所示的核苷酸序
列，引物L1為序列表中SEQ?ID?No.12所示的核苷酸序列，引物R2為序列表中SEQ?
ID?No.13所示的核苷酸序列，引物L2為序列表中SEQ?ID?No.14所示的核苷酸序
列，引物L3為序列表中SEQ?ID?No.15所示的核苷酸序列。
2.一種利用甲基化原理檢測血液中轉移肝癌細胞的標志物，其特征在于，
所述標志物衍生于肝癌特異性低調控基因精氨酸代琥珀酸合成酶基因和精氨酸
代琥珀酸裂解酶基因的甲基化的第一外顯子和啟動子區域；所述精氨酸代琥珀酸
合成酶基因甲基化的第一外顯子和啟動子區域核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.
1所示，其中標志物為一個或多個甲基化的CpG島并由SEQ?ID?No.3表示；所述精
氨酸代琥珀酸裂解酶基因的甲基化的第一外顯子和啟動子區域核苷酸序列如序
列表中SEQ?ID?No.2所示，其中標志物為一個或多個甲基化的CpG島并由SEQ?ID?
No.4或SEQ?ID?No.5表示。