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一種檢測豬痢疾的實時熒光PCR試劑盒及寡核苷酸序列

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-08
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201110330473.4 
  • 技術(專利)名稱 一種檢測豬痢疾的實時熒光PCR試劑盒及寡核苷酸序列 
  • 項目單位 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
  • 發明人 張偉,高志強,李寧,安健,凌鳳俊,張鶴曉,張利峰,汪琳,柏亞鐸,谷強,喬彩霞,蒲靜,吳丹,賴平安 
  • 行業類別 健康產品質檢-標準化和計量
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 錢小浩
  • 發布時間 2021-12-08  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種檢測豬痢疾的實時熒光PCR試劑盒及核苷酸序列。所述一組檢測豬痢疾的寡核苷酸序列,為序列表SEQIDNo:1至序列表SEQIDNo:3所示的寡核苷酸序列。本發明還提供了一種含有上述寡核苷酸序列的檢測試劑盒。本發明的優點是:實時熒光PCR技術被應用到豬痢疾的檢測中,進一步提高了檢測的特異性、靈敏度,減少了工作量,提高了工作效率,而且還可以對目的片段進行定量檢測。通過反應條件的優化,該實時熒光PCR最低可檢測至10拷貝/反應的病原量。該方法還對來自七個豬場的318份臨床樣品進行了檢測。實驗結果表明,該方法是一種特異、靈敏、高效的檢測方法。這項技術在進出境樣品檢疫和臨床疫病的監控和診斷中都具有極大的應用前景。
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  • 02

    說明書

    1.一組檢測豬痢疾的寡核苷酸序列,其特征在于,其寡核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:1至SEQ?ID?NO:3,其中SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2分別為檢測豬痢疾的引物I和引物II,序列SEQ?ID?NO:3為檢測豬痢疾的熒光探針。2.根據權利要求1所述的檢測豬痢疾的寡核苷酸序列,其特征在于:所述探針序列SEQ?ID?NO:3的5’端標記報告熒光基團FAM,3’端標記淬滅熒光基團TAMRA,第10、14、16位的堿基用LNA進行修飾。3.一種檢測豬痢疾的試劑盒,其特征在于,由以下組分組成:(1)DNA提取液I:其配制方法為PEG?8000?20.74g,加NaCl?17.53?g,用三蒸水定容至100mL;(2)DNA提取液II:其配制方法為1.0?mol/L?Tris-Cl?2.0mL,2.0?mol/L?KCl?5.0mL,0.5?mol/L?EDTA?0.5mL,NP-40?1.0?mL,?用三蒸水定容至100mL;(3)PCR反應液,包括:PCR緩沖液、MgCl2、dNTP、引物I、引物II和探針;(4)Taq?DNA聚合酶;(5)無DNA酶的滅菌純化水;(6)陰性對照:DEPC水;?(7)陽性對照:為豬痢疾短/密螺旋體nox基因片段,所述nox基因片段的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:4所示;其中,引物I的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:1所示,引物2的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:2所示,探針的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:3所示,探針的5’端標記報告熒光基團FAM,3’端標記淬滅熒光基團TAMRA,第10、14、16位的堿基用LNA進行修飾。4.根據權利要求3所述的檢測豬痢疾的試劑盒,其特征在于:所述PCR反應液為1×PCR緩沖液、3.0mM?MgCl2、0.2mM?dNTP、0.2μM引物I、0.2?μM引物II和0.1?μM探針。
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專利技術附圖

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