1.生物原胺類神經遞質和/或其代謝產物的前處理方法,包括將含有生物原胺類神經
遞質和/或其代謝產物的樣品衍生化,以及將衍生化產物進行在線固相萃取的步驟;其中,
所述衍生化是樣品與衍生化試劑反應;所述衍生化試劑為對二甲胺基苯磺酰氯;所述在線
固相萃取的步驟如下:
在線固相萃取的流動相為水和乙腈;
在線固相萃取柱為美國Thermo公司Retain PEP Javelin,10mm×2.1mm的SPE柱,流動
相的洗脫程序為:乙腈15v/v%,0min,0.5mL/min,→乙腈15v/v%,2min,0.5mL/min→乙腈
95v/v%,5min,0.5mL/min→乙腈95v/v%,8min,1.0mL/min→乙腈95v/v%,8.5min,1.0mL/
min→乙腈95v/v%,9.0min,1.0mL/min→乙腈15v/v%9.01min,0.5mL/min→乙腈15v/v%,
10.5min,0.5mL/min→乙腈15v/v%,12min,0.5mL/min;
或在線固相萃取柱為美國Thermo公司HYPERSIL ODS預柱,20×4mm,5μm,流動相的洗脫
程序為:乙腈20v/v%,0min,0.4mL/min,→乙腈20v/v%,2min,0.4mL/min,→乙腈90v/v%,
6min,0.4mL/min→乙腈90v/v%,8.5min,0.4mL/min→乙腈90v/v%,10min,0.4mL/min→乙
腈20v/v%,10.01min,0.4mL/min→乙腈20v/v%,12min,0.4mL/min。
2.根據權利要求1所述的前處理方法,其特征在于如下(1)-(8)的任意一項或者多項:
(1)衍生化試劑以甲醇或乙腈為溶劑配置成溶液使用;
(2)衍生化在堿性環境下進行;
(3)衍生化溫度為20-80℃;
(4)衍生化時間1-60min;
(5)衍生化為取代反應;
(6)樣品為在體內或體外含細胞、組織、器官和維持體內正常功能的環境介質中至少一
種的生物基質;
(7)生物原胺類神經遞質或其代謝產物為如下任意一種或多種:多巴胺、5-羥色胺、犬
尿喹啉酸、4-二羥基苯乙酸、5-羥吲哚乙酸、5-羥基吲哚-2-羧酸、高香草酸、3,4-二羥基芐
胺、3-羥基鄰氨基苯甲酸、去甲腎上腺素、腎上腺素、犬尿氨酸、3-甲氧基-4-羥基苯乙二醇、
色氨酸、3-羥基犬尿氨酸、香草基扁桃酸、褪黑素和喹啉酸;
(8)還包括樣品衍生化前進行蛋白沉淀。
3.根據權利要求2所述的前處理方法,其中,所述溶液濃度為1ng/mL-10mg/mL。
4.根據權利要求2所述的前處理方法,其中,所述堿性環境由乙酸銨、硼酸-碳酸氫鈉緩
沖鹽、磷酸-磷酸鈉緩沖鹽、碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖鹽、碳酸氫鈉-氫氧化鈉緩沖鹽、硼酸-氫
氧化鈉緩沖鹽和硼酸-四硼酸鈉緩沖鹽中一種或多種形成。
5.根據權利要求2所述的前處理方法,其中,所述樣品為腦微滲析液、腦脊液、人工腦脊
液、血漿、全血、血清、尿液和唾液中的一種或多種。
6.根據權利要求2所述的前處理方法,其中,生物原胺類神經遞質或其代謝產物為多巴
胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、5-羥色胺和犬尿氨酸中的一種或多種。
7.根據權利要求2所述的前處理方法,其中,所述蛋白沉淀是樣品和有機溶劑混合、離
心取上清液。
8.根據權利要求7所述的前處理方法,其中,有機溶劑為甲醇-乙腈溶劑或者三氯乙酸-
高氯酸溶劑。
9.根據權利要求8所述的前處理方法,其中,樣品和有機溶劑體積比為(1:1)-(1:5)。
10.生物原胺類神經遞質和/或其代謝產物的檢測方法,包含權利要求1-9任一所述的
前處理方法,以及對前處理產物進行測定的步驟。
11.根據權利要求10所述的檢測方法,其特征在于如下(1)-(8)任意一項或者多項:
(1)所述測定為定性或者定量測定;
(2)采用液質聯用進行測定;
(3)液相色譜儀為美國Thermo公司U3000液相色譜儀,配有雙三元梯度泵、在線真空脫
氣機、自動進樣器、VWD檢測器和變色龍7.1軟件;分析柱:色譜柱ZORBAX SB-C18,50×2.1mm
×3.5μm,美國Agilent公司;
在線固相萃取柱采用美國Thermo公司Retain PEP Javelin,10mm×2.1mm的SPE柱,液
相色譜流動相的洗脫泵的洗脫程序為:乙腈30v/v%,0min,0.3mL/min,閥切換:1-6→乙腈
30v/v%,2min,0.3mL/min,閥切換:1-2→乙 腈90v/v%,5min,0.3mL/min→乙腈90v/v%,
8min,0.3mL/min,閥切換:1-6→乙腈30v/v%,8.5min,0.3mL/min→乙腈30v/v%,9.0min,
0.3mL/min→乙腈30v/v%9.01min,0.3mL/min→乙腈15v/v%,10.5min,0.5mL/min→乙腈
30v/v%,12min,0.3mL/min;
或在線固相萃取柱為美國Thermo公司HYPERSIL ODS預柱,20×4mm,5μm,液相色譜流動
相的洗脫泵的洗脫程序為:乙腈30v/v%,0min,0.3mL/min,閥切換:1-6→乙腈30v/v%,
2min,0.3mL/min,閥切換:1-2→乙腈90v/v%,6min,0.3mL/min→乙腈90v/v%,8.5min,
0.3mL/min,閥切換:1-6→乙腈30v/v%,10min,0.3mL/min→乙腈30v/v%,10.01min,
0.3mL/min→乙腈30v/v%,12min,0.3mL/min;
(4)液相色譜的柱溫為30-35℃;
(5)液相色譜的樣品池保持4℃;
(6)液相色譜的流動相為水和乙腈;
(7)質譜的離子源為電噴霧離子源;
(8)所述前處理產物為在線固相萃取的轉移階段轉移至液相色譜的物質。
12.根據權利要求11所述的檢測方法,其中,質譜的離子噴射電壓為4000-4500V。
13.根據權利要求11所述的檢測方法,其中,質譜的霧化氣壓力為35-45psi。
14.根據權利要求11所述的檢測方法,其中,質譜的干燥器溫度為300-350℃,流速為9-
10L/min。
15.根據權利要求11所述的檢測方法,其中,質譜的檢測方式為正離子多反應監測模
式。
展開