本發明涉及一種人染色體P16基因探針的制備方法，還涉及利用人染色體P16基因探針制備一種人染色體P16基因檢測試劑盒，應用本發明的人染色體P16基因探針及相應的試劑盒可以對人染色體P16基因異常進行準確、快速的檢測。

1.一種人染色體P16基因探針的制備方法，其特征在于制備步驟包括：
(1)克隆篩選：P16基因位于人染色體9p21區段，挑選包含有該基因的克隆，挑選的克
隆號為：RP11-149I2；
(2)克隆培養和鑒定：購買克隆Invitrogen?RPCI11.C，取適量克隆菌液添加到500ml
的TB培養液(氯霉素抗性)中，37℃搖床中搖菌培養24～48小時；使用STS引物對進行克隆鑒
定，其引物序列分別為上游引物5’-ATCCAACATGCCATAGCTCC-3’和下游引物
5’-TTTGTCCCATGTCACTGGAA-3；
(3)P16基因探針制備：對鑒定陽性的菌液，進行質粒DNA的提取；通過適當稀釋質粒
DNA，對質粒DNA定量；然后，通過缺口平移方法對質粒DNA進行熒光標記；對標記產物進行乙
醇沉淀和濃縮；獲得P16探針，避光、-20℃儲存；
P16基因探針標記的熒光素為熒光素標記的dUTP；
(4)P16基因探針驗證：使用人類正常分裂中期淋巴細胞滴片進行探針驗證。
2.根據權利要求1的方法，其特征還在于克隆培養和鑒定步驟中PCR擴增條件均為：95℃5
分鐘；(94℃30秒，55℃30秒，72℃45秒)×40循環；72℃10分鐘。