本發(fā)明提供一種用于兔支氣管敗血波氏桿菌的懸浮熒光免疫檢測(cè)方法，包括有用于檢測(cè)兔支氣管敗血波氏桿菌的懸浮熒光免疫檢測(cè)試劑盒及其間接懸浮免疫熒光檢測(cè)方法。其中，試劑盒成份包括用于檢測(cè)兔支氣管敗血波氏桿菌的單因子血清抗體、FITC標(biāo)記羊抗小鼠IgG、陽(yáng)性對(duì)照樣品、固定液和PBS洗液；所述的檢測(cè)兔支氣管敗血波氏桿菌的單因子血清抗體，是用兔支氣管敗血波氏桿菌QDBb01株外膜蛋白抗原免疫小鼠制備的。以此試劑盒為基礎(chǔ)構(gòu)建的兔支氣管敗血波氏桿菌懸浮熒光免疫檢測(cè)方法，可檢測(cè)臨床上兔支氣管敗血波氏桿菌感染兔病料組織中的抗原，判定是否感染兔支氣管敗血波氏桿菌，其特異性強(qiáng)、靈敏度高、可重復(fù)性好且檢測(cè)速度快。

1.一種用于檢測(cè)兔支氣管敗血波氏桿菌的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含如
下的組分：
1)一抗：用于檢測(cè)兔支氣管敗血波氏桿菌的單因子血清抗體；
2)二抗：FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG；
3)PBS洗液；其配比為NaCl 8.0g/L；KCl 0.2g/L；Na₂HPO₄ 3.58g/L；KH₂PO₄ 0.24g/L；
所述的單因子血清抗體，其制備方法如下：將兔支氣管敗血波氏桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，并
4000r/min收集菌體，再用pH7.2的Tris-Hcl溶液重懸菌體，將重懸菌體超聲波破碎，破碎工
作1s，間隔時(shí)間3s，全程時(shí)間12min，總共180次；再4000r/min低速離心去除未破碎掉的細(xì)菌
菌體和較重的細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器，取上清液于100000r/min，超速離心20min，去上清；將含
外膜蛋白的沉淀用含2％Triton X-100的Tris-HCl緩沖液溶解，室溫下孵育1h去除內(nèi)膜蛋
白，再進(jìn)行100000r/min超速離心30min，沉淀用緩沖液再重懸，采用能夠截留蛋白分子量在
40kDa以上的半透膜透析掉小分子外膜蛋白；將純化后的兔支氣管敗血波氏桿菌外膜蛋白
濃度稀釋至50μg/ml，再與弗氏完全佐劑按照體積比1:1乳化制備亞單位疫苗，將此疫苗三
次強(qiáng)化免疫BALB/c小鼠，每次間隔14d后，用兔支氣管敗血波氏桿菌進(jìn)行攻毒，選擇攻毒后
無(wú)發(fā)病臨床癥狀的健康小鼠采集血清制備成單因子血清抗體；
用于制備單因子血清抗體的所述的兔支氣管敗血波氏桿菌為兔支氣管敗血波氏桿菌
QDBb01株，保藏編號(hào)為CCTCC M 2016607；
所述的試劑盒中還包含有作為陽(yáng)性對(duì)照樣品的兔支氣管敗血波氏桿菌。