本發(fā)明屬于分子生物學領(lǐng)域，公開了一種用于低豐度DNA突變的富集引物、富集方法及試劑盒，用于低豐度DNA突變的檢測方法及檢測試劑盒。本發(fā)明基于PCR原理富集低豐度DNA突變，富集引物的正向引物包括2條短引物，長度為10?16nt，2條短引物中AF引物可與野生型和突變型模板均匹配。AR引物設(shè)計有與突變位點互補的堿基，位于AR引物的中間位置或中間偏5’端位置，且AR引物3’端修飾有MGB基團。AF引物3’端與AR引物5’端與模板結(jié)合的位置間隔0?5個堿基。本發(fā)明所述富集方法可將豐度在萬分之一的突變型模板富集100～1000倍，富集產(chǎn)物可用多種方法進行后續(xù)分析，操作簡單，應用靈活，靈敏度高。

1.一種用于低豐度DNA突變的富集引物，當所述DNA突變?yōu)槿薚790M DNA突變時，所述用于低豐度人T790M DNA突變的富集引物，包括正向引物，所述正向引物由T790M-AF引物和T790M-AR引物組成，所述T790M-AF引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述T790M-AR引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示且3’端修飾有MGB基團，所述T790M-AF引物的3’端與所述T790M-AR引物的5’端與模板的結(jié)合位置間隔3個堿基；還包括反向引物T790M-R，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；當所述DNA突變?yōu)槿薒858R DNA突變時，所述用于低豐度人L858R DNA突變的富集引物，包括正向引物，所述正向引物由L858R-AF引物和L858R-AR引物組成，所述L858R-AF引物核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述L858R-AR引物核苷酸序列如SEQ ID No.5所示且3’端修飾有MGB基團，所述L858R-AF引物的3’端與所述L858R-AR引物的5’端與模板的結(jié)合位置間隔4個堿基；還包括反向引物L858R-R，其核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。2.一種非治療和/或診斷目的的低豐度DNA突變的富集方法，以待測樣本為模板，以權(quán)利要求1所述引物進行富集擴增。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述富集方法，其特征在于，當所述DNA突變?yōu)槿薚790M DNA突變時，以待測樣本為模板，以權(quán)利要求1所述用于低豐度人T790M DNA突變的富集引物進行富集擴增；當所述DNA突變?yōu)槿薒858R DNA突變時，以待測樣本為模板，以權(quán)利要求1所述用于低豐度人L858R DNA突變的富集引物進行富集擴增。4.一種低豐度DNA突變的富集試劑盒，包括權(quán)利要求1所述引物；當所述DNA突變?yōu)槿薚790M DNA突變時，包括權(quán)利要求1所述用于低豐度人T790M DNA突變的富集引物；當所述DNA突變?yōu)槿薒858R DNA突變時，包括權(quán)利要求1所述用于低豐度人L858R DNA突變的富集引物；還包括突變富集試劑，所述突變富集試劑由dNTP、MgCl₂、NH₄Cl、pH8.0 Tris-HCl、KCl、DNA聚合酶組成。5.一種非治療和/或診斷目的的低豐度DNA突變的檢測方法，以權(quán)利要求2所述富集方法富集后的擴增產(chǎn)物為模板進行擴增然后進行Sanger測序。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測方法，其特征在于，當所述DNA突變?yōu)槿薚790M DNA突變時，以權(quán)利要求3所述富集方法富集后的擴增產(chǎn)物為模板，以人T790M測序擴增引物進行擴增，然后以測序通用引物進行Sanger測序；所述人T790M測序擴增引物由CX-T790M-F和CX-T790M-R組成，所述CX-T790M-F的核酸序列如SEQID No.7所示，所述CX-T790M-R的核酸序列如SEQ ID No.8所示；當所述DNA突變?yōu)槿薒858R DNA突變時，以權(quán)利要求3所述富集方法富集后的擴增產(chǎn)物為模板，以人L858R測序擴增引物進行擴增，然后以測序通用引物進行Sanger測序；所述人L858R測序擴增引物由CX-L858R-F和CX-L858R-R組成，所述CX-L858R-F的核酸序列如SEQID No.9所示，所述CX-L858R-R的核酸序列如SEQ ID No.10所示。7.一種低豐度DNA突變的檢測試劑盒， 包括權(quán)利要求1所述突變富集引物。