本發明涉及一種純化與擴增人骨髓間充質干細胞的制備方法，包括：(1)采用基于抗體的負向分選法收集間充質干細胞；(2)采用無血清培養基擴增間充質干細胞。本發明優于常規的分離方法，在安全性和擴增能力方面，本發明提供的無血清培養基明顯好于常規的有血清培養基，具有良好的應用前景。

1.一種純化與擴增人骨髓間充質干細胞的制備方法，包括：(1)采用基于抗體的負向分選法：在骨髓中加入抗體混合物使非目標細胞和紅細胞交聯，經密度梯度離心，從血漿層下層收集間充質干細胞；(2)采用無血清培養基擴增間充質干細胞，其中，無血清培養基添加以下組分：10μg/ml重組人胰島素、20ng/ml重組人表皮生長因子、20ng/ml重組人堿性成纖維細胞生長因子、10ng/ml重組人轉化生長因子-β、20ng/ml重組人血小板衍生生長因子-BB、0.5μg/ml氫化可的松、50μg/ml維生素C、2mM還原型谷胱甘肽、5μg/ml重組人轉鐵蛋白、1μg/ml乙醇胺、2mML-谷氨酰胺、50μg/ml輔酶A、5U/ml重組人凝血酶、10μg/ml慶大霉素和5ng/ml亞硒酸鈉。2.根據權利要求1所述的一種純化與擴增人骨髓間充質干細胞的制備方法，其特征在于：在所述步驟(2)擴增間充質干細胞之前用1～10μg/mL的重組人纖連蛋白包被培養瓶。3.根據權利要求2所述的一種純化與擴增人骨髓間充質干細胞的制備方法，其特征在于：所述培養瓶在4℃的條件下包被過夜。4.根據權利要求1所述的一種純化與擴增人骨髓間充質干細胞的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中的無血清培養基為DMEM-F12。5.根據權利要求1所述的一種純化與擴增人骨髓間充質干細胞的制備方法，其特征在于：在所述步驟(2)擴增間充質干細胞之后細胞傳代過程中使用TrypLE^TM消化細胞。