本發明公開了一種細菌外毒素的生產方法，包括細菌及產毒培養、細菌外毒素的提取、純化、保藏工序，細菌的產毒培養是在微生物透析培養器中進行，微生物透析培養器包括培養基室和培養室，培養基室和培養室之間設置有透析膜及支撐保護透析膜的裝置，培養基室的容積與培養室的總容積之比根據微生物的培養時間的長短在3∶1到1∶6之間選定，微生物的生長所需要的設施設置在培養基室中；其生產方法包括產毒培養、除菌過濾、濃縮沉淀、透析結晶、保藏工序。采用本發明的方法生產毒素，優化細菌生長環境，簡化了細菌外毒素的濃縮、提純工藝，其收獲率可以由原來的17％～33％提高到了90％，提純時間由原來自然透析的12～15天縮短為12～24小時左右。

1.一種細菌A型肉毒素的生產方法，包括細菌產毒培養、細菌外毒素的提取、純化、保藏工序，其特征在于：包括如下步驟A、產毒培養細菌的產毒培養是在微生物透析培養器中進行，微生物透析培養器包括培養基室和培養室，培養基室和培養室之間設置有透析膜及支撐保護透析膜的裝置，培養基室為一個，培養室裝配培養基室上，培養室的數量是培養基室的倍數，微生物透析培養器的形狀應采用立體幾何原理中表面積大而體積相對小的形狀，培養基室的容積與培養室的總容積之比根據微生物的培養時間的長短在3∶1到1∶6之間選定，微生物的生長所需要的設施設置在培養基室中；其培養步驟包括A1.調制培養液和產毒培養基，所述培養液為0.6％NaCl溶液，所述產毒培養基為消化型培養基，并按照1000ml培養基加入200±50g酵母浸膏的比例加入酵母浸膏，A2.根據生產量的大小和培養時間選擇、組裝相應的透析培養器，將培養基和培養液分別加注到透析培養基室和培養室內，在113℃下高溫滅菌后冷卻到35℃～40℃，A3.將經過適當培養的培養菌菌種，接種到培養室內，接種量為按培養室中培養液量的3％～5％，按培養菌的培養時間和培養溫度進行產毒培養；B、除菌過濾收取培養好的培養菌菌液，然后在≤0℃的環境下以6000轉/分鐘的速度離心處理，取上清液，過濾，即得外毒素毒液；C、濃縮沉淀將毒液與-70℃的無水乙醇按1∶2的比例混合，將混合液放入-20℃環境中靜置8～12小時，然后在≤0℃的環境下以12000轉/分鐘的速度離心25～30分鐘，去上清液，所剩固體即是變性的細菌外毒素；D、透析結晶將離心后所得固體物用適量的硫酸銨溶液溶解并充分混合，然后倒入透析袋內，在≤5℃環境中用大分子吸附劑將透析袋內的硫酸銨溶液吸出，重復此步驟，直到OD260/OD280值小于0.6為止，透析袋內所剩固體物即為結晶毒素；E、保藏將純度達到OD260/OD280值小于0.6、毒力合格的結晶物放入≤15℃的保護劑中稀釋，并按蛋白質的凍干曲線凍干，然后冷藏；所述保護劑由明膠、蔗糖、甘露醇、蒸餾水按3/5/5/100的比例配制而成。2.根據權利要求1所述的一種細菌A型肉毒素的生產方法，其特征在于：所述培養時間大于120小時時，培養基室的容積與培養室的總容積之比為3∶1；培養時間為96～120小時時，培養基室的容積與培養室的總容積之比為2.5∶1，培養時間為72～96小時時，培養基室的容積與培養室的總容積之比為2∶1，培養時間為48～72小時時，培養基室的容積與培養室的總容積之比為1.5∶1，培養時間為24～48小時時，培養基室的容積與培養室的總容積之比為1∶1～2，培養時間小于24小時時，培養基室的容積與培養室的總容積之比為1∶3～6。