本發(fā)明涉及一種臍血Treg細胞的體外擴增方法，包括以下步驟；S1：從分離單個核細胞；S2：調整細胞密度，接種至培養(yǎng)瓶，添加滅活血漿；第一天：加入擬雌內酯、TGF?β、CD3/CD28單克隆抗體和IL?2；S3：第四天：補加培養(yǎng)基，并添加滅活血漿、擬雌內酯和TGF?β并使其終濃度保持不變；S4：第六天：補加培養(yǎng)基，并使其他成分的終濃度均保持不變；S5：第九天：補加培養(yǎng)基，并并使其他成分的終濃度均保持不變；S6：第十二天：收集細胞。該方法采用擬雌內酯+TGF?β共同作用誘導CD4+CD25+Tregs的擴增，擴增效率高，無需預先純化便可得到高純度的Treg細胞。

1.一種臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：所述提取方法包括以下步驟；S1：從臍血中分離單個核細胞；S2：采用培養(yǎng)基將單個核細胞的細胞密度調整至0.1×10⁶/ml～10×10⁶/ml，然后將該密度的單個核細胞接種至培養(yǎng)瓶，添加滅活血漿；第一天：向培養(yǎng)瓶中加入擬雌內酯、TGF-β、CD3/CD28單克隆抗體和IL-2；S3：第四天：補加培養(yǎng)基，并添加滅活血漿、擬雌內酯、TGF-β、CD3/CD28單克隆抗體和IL-2并使其終濃度與步驟S2中各種成分的終濃度一致；S4：第六天：補加培養(yǎng)基，并添加滅活血漿、擬雌內酯、TGF-β、CD3/CD28單克隆抗體和IL-2并使其終濃度均保持不變；S5：第九天：補加培養(yǎng)基，并添加滅活血漿、擬雌內酯、TGF-β、CD3/CD28單克隆抗體和IL-2并使其終濃度均保持不變；S6：第十二天：收集細胞，其細胞擴增倍數(shù)達250倍，細胞純度大于80％。2.根據(jù)權利要求1所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S1中，分離單個核細胞的方法為：取臍血，并在600～900g/min離心10～20min，收集上層血漿，將血漿置于50～60℃滅活20～40min，2500rpm/min離心后備用；然后加入等體積PBS稀釋剩余的血細胞，用常規(guī)密度梯度離心的方法分離臍血。3.根據(jù)權利要求1所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S2中，采用培養(yǎng)基將單個核細胞的細胞密度調整至1×10⁶/ml，然后進行接種，接種后添加滅活血漿至該滅活血漿終濃度為3～7％。4.根據(jù)權利要求3所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：所述滅活血漿添加至其終濃度為5％為止。5.根據(jù)權利要求1所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S2中，所述擬雌內酯、TGF-β、CD3/CD28單克隆抗體和IL-2的加入量為：加入至其終濃度分別為擬雌內酯1～500ng/ml、TGF-β1～10ng/ml、CD3/CD28單克隆抗體0.5～4μg/ml和IL-21000～3000U/ml為止。6.根據(jù)權利要求5所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S2中，所述擬雌內酯、TGF-β、CD3/CD28單克隆抗體和IL-2的加入量為：加入至其終濃度分別為擬雌內酯100ng/ml、TGF-β5ng/ml、CD3/CD28單克隆抗體2μg/ml和IL-2 2000U/ml為止。7.根據(jù)權利要求6所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S3中，培養(yǎng)基的補加量為步驟S2中接種至培養(yǎng)瓶中體積量的0.5～0.7倍；步驟S4中，培養(yǎng)基的補加量為步驟S2中接種至培養(yǎng)瓶中體積量的1.3～2.0倍；步驟S5中，培養(yǎng)基的補加量為步驟S2中接種至培養(yǎng)瓶中體積量的3～5倍。8.根據(jù)權利要求7所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S3中，培養(yǎng)基的補加量為步驟S2中接種至培養(yǎng)瓶中體積量的0.6倍；步驟S4中，培養(yǎng)基的補加量為步驟S2中接種至培養(yǎng)瓶中體積量的1.6倍；步驟S5中，培養(yǎng)基的補加量為步驟S2中接種至培養(yǎng)瓶中體積量的4倍。9.根據(jù)權利要求1～8中任一項所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S2～S6的細胞培養(yǎng)中，所述的培養(yǎng)基為RPMI1640培養(yǎng)基。10.根據(jù)權利要求9所述的臍血Treg細胞的體外擴增方法，其特征在于：步驟S2～S6中，細胞培養(yǎng)均在37℃、5％CO₂的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。