本發(fā)明公開一種紅球菌產(chǎn)表面活性劑的制備方法，利用從海岸灘涂淤泥中分離篩選出的紅球菌，經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)生物表面活性劑。技術(shù)步驟包括菌種活化、菌種種子液培養(yǎng)、菌種發(fā)酵培養(yǎng)和生物表面活性劑制備。將紅球菌菌種先接種于固體發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行活化，然后接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中獲得種子液，再將種子液接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中獲得發(fā)酵培養(yǎng)液，然后將發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)酸沉淀、離心分離、有機(jī)溶劑萃取、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，制成具有高表面活性的生物表面活性劑成品。本發(fā)明涉及的紅球菌生物表面活性劑，制備工藝簡(jiǎn)便，具有對(duì)石油很好的乳化作用，制備方法便于推廣應(yīng)用，有很好的市場(chǎng)應(yīng)用潛力。

1.一種紅球菌產(chǎn)表面活性劑的制備方法，其特征在于：其操作步驟包括菌種活化(S₁)、
菌種種子液培養(yǎng)(S₂)、菌種發(fā)酵培養(yǎng)(S₃)和生物表面活性劑制備(S₄)；菌種活化(S₁)是將從
海岸灘涂淤泥中分離篩選而獲得紅球菌SY095接種于固體發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行活化，菌種種子
液培養(yǎng)(S₂)是將菌種活化(S₁)活化后的紅球菌菌種接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中獲得種子液，
菌種發(fā)酵培養(yǎng)(S₃)是將菌種種子液培養(yǎng)(S₂)培養(yǎng)的種子液接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中獲得發(fā)
酵培養(yǎng)液，生物表面活性劑制備(S₄)是將菌種發(fā)酵培養(yǎng)(S₃)獲得的發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)酸沉淀、離
心分離、有機(jī)溶劑萃取、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)獲得生物表面活性劑成品；
所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基是以大豆油為碳源的液體發(fā)酵培養(yǎng)基：大豆油15～25g/L，尿素2
～4g/L，K₂HPO₄ 0.5～1.5g/L，KH₂PO₄ 0.5～1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.25～0.75g/L，pH 7.0～
8.0，121℃滅菌30min；
所述菌種發(fā)酵培養(yǎng)(S₃)是將菌種種子液培養(yǎng)(S₂)獲得的菌種種子液接種于50L液體發(fā)
酵培養(yǎng)基中進(jìn)行中試發(fā)酵，在30±3℃、攪拌速度120rpm～180rpm，溶氧25％～35％條件下
培養(yǎng)10h～36h，獲得發(fā)酵培養(yǎng)液；
所述紅球菌的菌種為紅球菌SY095(Rhodococcus sp.SY095)，從海岸灘涂淤泥中分離
篩選而獲得，己于2015年04月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中
心，保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC No.10724。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅球菌產(chǎn)表面活性劑的制備方法，其特征在于，所述固體
發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：大豆油15～25g/L，尿素2～4g/L，K₂HPO₄ 0.5～1.5g/L，KH₂PO₄ 0.5～
1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.25～0.75g/L，pH 7.0～8.0，1.5％瓊脂，121℃滅菌30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅球菌產(chǎn)表面活性劑的制備方法，其特征在于，所述菌種
活化(S₁)是將紅球菌菌種接種于固體發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行活化，30℃溫箱培養(yǎng)1d～2d。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅球菌產(chǎn)表面活性劑的制備方法，其特征在于，所述菌種
種子液培養(yǎng)(S₂)是將菌種活化(S₁)活化后的紅球菌菌種接種于500mL液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在
30℃±3℃、搖床轉(zhuǎn)速160rpm～200rpm條件下培養(yǎng)1d～2d，獲得菌種種子液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅球菌產(chǎn)表面活性劑的制備方法，其特征在于，所述生物
表面活性劑制備(S₄)是在菌種發(fā)酵培養(yǎng)(S₃)發(fā)酵停止后，下罐，用5N的HCl調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液
pH值至2±0.5，室溫靜置4～24h后撇取浮于發(fā)酵培養(yǎng)液表面的膏狀物，在4℃～8℃、轉(zhuǎn)速
10000rpm～15000rpm條件下高速離心，去除多余水分；然后，將膏狀物使用氯仿:甲醇為1:1
的溶液抽提，70℃～90℃，轉(zhuǎn)速60rpm～100rpm旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥，獲得生物表面活性劑成品。