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一種高光學(xué)純度α-熊果苷和高粘接性葡聚糖的生產(chǎn)方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-08-28
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201710214888.2 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種高光學(xué)純度α-熊果苷和高粘接性葡聚糖的生產(chǎn)方法 
  • 項(xiàng)目單位 常茂生物化學(xué)工程股份有限公司
  • 發(fā)明人 萬屹東,馬江鋒,高有軍,姜岷,潘春 
  • 行業(yè)類別 醫(yī)藥制造-化學(xué)藥品制劑
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 孫魁林
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-08-28  
  • 01

    項(xiàng)目簡介

    一種利用腸膜明串珠菌聯(lián)產(chǎn)高光學(xué)純度α?熊果苷和高粘接性葡聚糖方法,該方法以蔗糖和氫醌為底物,在弱酸性環(huán)境下,一步發(fā)酵生產(chǎn)得到α?熊果苷和葡聚糖,具體包括:1)一級(jí)種子培養(yǎng):以0.1~0.2%的接種量取假腸膜明串珠菌菌液接種于種子培養(yǎng)基中,于37℃,250rpm培養(yǎng)10~12h;2)二級(jí)種子培養(yǎng):以1~2%的接種量從一級(jí)種子液轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基中,于37℃,250rpm,培養(yǎng)10~12h;3)發(fā)酵培養(yǎng):將二級(jí)種子液以5~8%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中,調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中pH為6.0~6.8,發(fā)酵全程通空氣,控制空氣流量為0.1~0.3vvm,于37℃,250~300 rpm,培養(yǎng)12~16h。該方法可通過菌株發(fā)酵直接獲得高光學(xué)純度α?熊果苷和高粘接性葡聚糖,底物利用率高,反應(yīng)簡單快捷、條件溫和、耗能少、適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種聯(lián)產(chǎn)高光學(xué)純度α-熊果苷和高粘接性葡聚糖方法,其特征在于,該方法利用假腸膜明串珠菌以蔗糖和氫醌為底物,在弱酸性環(huán)境下,一步發(fā)酵生產(chǎn)得到α-熊果苷和葡聚糖,所述假腸膜明串珠菌為假腸膜明串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides)G123,保藏編號(hào)為CCTCC NO: M2014115;所述弱酸性環(huán)境為溶液pH6.0~6.8;所述假腸膜明串珠菌通過種子培養(yǎng)步驟后接入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),具體包括如下步驟:1)一級(jí)種子培養(yǎng):以0.1~0.2%的接種量取假腸膜明串珠菌菌液接種于種子培養(yǎng)基中,于37℃,250rpm培養(yǎng)10~12h;2)二級(jí)種子培養(yǎng):以1~2%的接種量從一級(jí)種子液轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基中,于37℃,250rpm,培養(yǎng)10~12h;3)發(fā)酵培養(yǎng):將二級(jí)種子液以5~8%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中,采用NaOH或Na2CO3調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中pH為6.0~6.8,發(fā)酵全程通空氣,控制空氣流量為0.1~0.3vvm,于37℃,250~300 rpm,培養(yǎng)12~16h;所述種子培養(yǎng)基為:蛋白胨3~10g/L、酵母粉3~10g/L、乙酸鈉3~10g/L、吐溫-80 0.5~5ml/L、C6H5O7(NH4)3 1~5g/L、K2HPO4?7H2O 1~5g/L、煙酸0.5~2g/L、MgSO4?7H2O 0.1~1g/L、MnSO4?H2O 0.01~1g/L、CaCl2 0.01~1g/L、FeCl2 0.01~1g/L、NaCl 0.01~1g/L、5~20g/L濃度蔗糖溶液單獨(dú)滅菌補(bǔ)加;所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:蛋白胨3~10g/L、酵母粉3~10g/L、乙酸鈉3~10g/L、吐溫-80 0.5~5ml/L、C6H5O7(NH4)3 1~5g/L、K2HPO4?7H2O 1~5g/L、煙酸0.5~5g/L、MgSO4?7H2O 0.1~1g/L、MnSO4?H2O 0.01~1g/L、CaCl2 0.01~1g/L、FeCl2 0.005~1g/L、NaCl 0.005~1g/L、Glu 0.1~3g/L、Val 0.1~0.3g/L、15g/L氫醌單獨(dú)滅菌分10次補(bǔ)加,90g/L蔗糖單獨(dú)滅菌與氫醌同時(shí)補(bǔ)加,分10次。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述NaOH或Na2CO3溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10~20%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述種子培養(yǎng)基為:蛋白胨4~8g/L、酵母粉4~8g/L、乙酸鈉4~8g/L、吐溫-80 1~2ml/L、C6H5O7(NH4)3 2~3g/L、K2HPO4?7H2O 2~3g/L、煙酸1~2g/L、MgSO4?7H2O 0.2~0.4g/L、MnSO4?H2O 0.05~0.08g/L、CaCl2 0.02~0.06g/L、FeCl2 0.01~0.02g/L、NaCl 0.01~0.02g/L、10~12g/L濃度蔗糖溶液單獨(dú)滅菌補(bǔ)加。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述種子培養(yǎng)基為:蛋白胨5.0g/L、酵母粉5.0g/L、乙酸鈉5.0g/L、吐溫-80 1ml/L、C6H5O7(NH4)3 2.0g/L、K2HPO4?7H2O 2.0g/L、煙酸1.0g/L、MgSO4?7H2O 0.2g/L、MnSO4?H2O 0.05g/L、CaCl20.02g/L、FeCl2 0.01g/L、NaCl0.01g/L、10g/L濃度蔗糖溶液單獨(dú)滅菌補(bǔ)加。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:蛋白胨4~8g/L、酵母粉4~8g/L、乙酸鈉4~8g/L、吐溫-80 1~2ml/L、C6H5O7(NH4)3 2~3g/L、K2HPO4?7H2O 2~3g/L、煙酸1~2g/L、MgSO4?7H2O 0.2~0.4g/L、MnSO4?H2O 0.05~0.08g/L、CaCl20.02~0.05g/L、FeCl2 0.01~0.05g/L、NaCl 0.01~0.05g/L、Glu 0.1~1g/L、Val 0.1~0.2g/L、15g/L氫醌單獨(dú)滅菌分10次補(bǔ)加,90g/L蔗糖單獨(dú)滅菌與氫醌同時(shí)補(bǔ)加,分10次。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基為蛋白胨5.0g/L、酵母粉5.0g/L、乙酸鈉5.0g/L、吐溫-80 1ml/L、C6H5O7(NH4)3 2.0g/L、K2HPO4?7H2O 2.0g/L、煙酸1.0g/L、MgSO4?7H2O 0.2g/L、MnSO4?H2O 0.05g/L、CaCl20.02g/L、FeCl2 0.01g/L、NaCl0.01g/L、Glu 0.35g/L、Val 0.115g/L、15g/L氫醌單獨(dú)滅菌分10次補(bǔ)加,90g/L蔗糖單獨(dú)滅菌與氫醌同時(shí)補(bǔ)加,分10次。7.根據(jù)權(quán)利要求1~6任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,包括如下步驟:1)一級(jí)種子培養(yǎng):以0.1~0.2%的接種量取假腸膜明串珠菌菌液接種于種子培養(yǎng)基中,于37℃,250rpm培養(yǎng)10~12h;2)二級(jí)種子培養(yǎng):以1~2%的接種量從一級(jí)種子液轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基中,于37℃,250rpm,培養(yǎng)10~12h;3)發(fā)酵培養(yǎng):將二級(jí)種子液以5~8%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中,采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10~20%(wt)NaOH或Na2CO3溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中pH為6.0~6.8,發(fā)酵全程通空氣,控制空氣流量為0.1~0.3vvm,于37℃,250~300 rpm,培養(yǎng)12~16h;所述假腸膜明串珠菌為假腸膜明串珠菌G123(Leuconostocpseudomesenteroides),保藏編號(hào)為CCTCC NO: M2014115;所述種子培養(yǎng)基為:蛋白胨5.0g/L、酵母粉5.0g/L、乙酸鈉5.0g/L、吐溫-80 1ml/L、C6H5O7(NH4)3 2.0g/L、K2HPO4?7H2O 2.0g/L、煙酸1.0g/L、MgSO4?7H2O 0.2g/L、MnSO4?H2O0.05g/L、CaCl20.02g/L、FeCl2 0.01g/L、NaCl 0.01g/L、10g/L濃度蔗糖溶液單獨(dú)滅菌補(bǔ)加;所述發(fā)酵培養(yǎng)基為蛋白胨5.0g/L、酵母粉5.0g/L、乙酸鈉5.0g/L、吐溫-80 1ml/L、C6H5O7(NH4)3 2.0g/L、K2HPO4?7H2O 2.0g/L、煙酸1.0g/L、MgSO4?7H2O 0.2g/L、MnSO4?H2O0.05g/L、CaCl20.02g/L、FeCl2 0.01g/L、NaCl 0.01g/L、Glu 0.35g/L、Val 0.115g/L、15g/L氫醌單獨(dú)滅菌分10次補(bǔ)加,90g/L蔗糖單獨(dú)滅菌與氫醌同時(shí)補(bǔ)加,分10次。
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