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用于測定神經毒素多肽的生物學活性的細胞測試系統

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-03
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201380053762.1 
  • 技術(專利)名稱 用于測定神經毒素多肽的生物學活性的細胞測試系統 
  • 項目單位 莫茨制藥有限及兩合公司
  • 發明人 K-H·艾澤勒,K·哈廷 
  • 行業類別 智慧健康-物聯網
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 馮文剛
  • 發布時間 2021-10-03  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及用于生成神經毒素敏感的、神經元分化的細胞的方法,所述方法包括步驟為:a)在引發所述腫瘤細胞神經元分化的條件和時間下,在培養基中培養能夠分化為神經元細胞的腫瘤細胞;和b)在具有100至270mOsm/kg的重量摩爾滲透壓濃度,并且包含(i)B27補充物和/或(ii)N2補充物的分化培養基中培養a)的經引發神經元分化的腫瘤細胞至少3天,從而獲得神經毒素敏感的、神經元分化的細胞。本發明還涉及通過本發明的方法可獲得的神經毒素敏感的、神經元分化的細胞。此外,本發明涵蓋用于測定神經毒素多肽的活性的方法,所述方法包括步驟為:a)將通過本發明的方法可獲得的神經毒素敏感的、神經元分化的細胞與神經毒素多肽相接觸;b)在允許神經毒素多肽發揮其生物學活性的條件下培養步驟a)的神經毒素敏感的、神經元分化的細胞3至74小時或72小時;和c)在根據步驟b)培養后,測定所述細胞中神經毒素多肽的活性。最后,本發明提供包含OptiMEM、FBS、B27補充物、和N2補充物的培養基。
    展開
  • 02

    說明書

    1.生成神經毒素敏感的、神經元分化的細胞的方法,所述方法包括步驟為:
    a)在引發所述腫瘤細胞神經元分化的條件和時間下,在培養基中培養能夠分化為神經
    元細胞的腫瘤細胞,其中腫瘤細胞是SiMa細胞;和
    b)在具有120至250mOsm/kg的重量摩爾滲透壓濃度,并且包含(i)B27補充物和/或(ii)
    N2補充物的分化培養基中培養a)的經引發神經元分化的腫瘤細胞至少3天,從而較之在具
    有290至350mOsm/kg的重量摩爾滲透壓濃度的分化培養基中培養的SiMa細胞,獲得對梭菌
    神經毒素BoNT具有增加的敏感性的神經毒素敏感的、神經元分化的細胞。
    2.權利要求1的方法,其中分化培養基還包含視黃酸。
    3.權利要求2的方法,其中所述視黃酸以0.01μM和300μM之間的濃度存在。
    4.權利要求1的方法,其中分化培養基還包含抗菌劑和/或抑制非神經元細胞生長的細
    胞抑制劑。
    5.權利要求1的方法,其中分化培養基還包含GT1b。
    6.權利要求5的方法,其中所述GT1b以25和75μM之間的濃度存在。
    7.權利要求5的方法,其中所述GT1b以50μM的濃度存在。
    8.權利要求1的方法,其中在權利要求1a)中引發所述細胞神經元分化的所述條件和時
    間包括從培養基中降低血清和/或添加視黃酸。
    9.權利要求1的方法,其中所述腫瘤細胞是SiMa細胞DSMZ ACC保藏號:164。
    10.權利要求1或9的方法,其中步驟a)中的培養基包含80至98.8%OptiMEM、1至10%
    FBS、0.2至5%B27補充物和/或0.2至5%N2補充物和,任選地,非必需氨基酸和/或抗菌素。
    11.權利要求1或9的方法,其中步驟b)中的分化培養基具有200至225mOsm/kg的重量摩
    爾滲透壓濃度。
    12.權利要求11的方法,其中步驟b)中的分化培養基包含78至98.3%neurobasal培養
    基,1至10%FBS,0.5至2%GlutaMAX,0.2至5%B27補充物,和/或0.2至5%N2補充物。
    13.權利要求1或9的方法,其中在步驟a)中培養SiMa細胞至少36小時。
    14.權利要求1或9的方法,其中步驟a)中的所述培養基還包含抗菌劑和/或非必需氨基
    酸(NEAA)。
    15.權利要求1或9的方法,其中在步驟a)中在組織培養皿上培養SiMa細胞,所述組織培
    養皿用至少一種選自以下組成的組的化合物包被:聚-L-賴氨酸、聚-D-賴氨酸、膠原蛋白、
    層粘連蛋白和明膠。
    16.用于測定神經毒素多肽的活性的方法,所述方法包括步驟為:
    a)通過權利要求1至15之任一項的方法獲得神經毒素敏感的、神經元分化的細胞,使該
    細胞與神經毒素多肽相接觸;
    b)在允許神經毒素多肽發揮其生物學活性的條件下培養步驟a)的神經毒素敏感的、神
    經元分化的細胞3至74小時;和
    c)在根據步驟b)培養后,測定所述細胞中神經毒素多肽的生物學活性。
    17.權利要求16的方法,其中在步驟b)中,在允許神經毒素多肽發揮其生物學活性的條
    件下培養步驟a)的神經毒素敏感的、神經元分化的細胞72小時。
    18.根據權利要求1的方法,其中步驟a)中的培養基包含93.5%OptiMEM、5%FBS,1%
    B27補充物和0.5%N2補充物。
    展開

專利技術附圖

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