1.一種產共軛亞油酸微生物發酵劑的制備方法,其特征是:1)以植物乳桿菌CICC23138為出發菌株,量取0.9%的生理鹽水10ml于試管內,經121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃,將植物乳桿菌CICC23138安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0.9%的生理鹽水中,震蕩使其溶解,在30℃恒溫箱中靜止活化30分鐘,備用;2)量取植物乳桿菌基礎培養基100ml于250ml三角瓶內,然后按基礎培養基體積的0.1%添加亞油酸,121℃滅菌20分鐘冷卻至37℃,按基礎培養基體積的5%接種1)步驟中已經活化的菌種,在37℃厭氧箱內靜止培養30小時,作為一級馴化菌株;然后量取植物乳桿菌基礎培養基100ml于250ml三角瓶內,按基礎培養基體積的0.2%添加亞油酸,121℃滅菌20分鐘冷卻至37℃,按基礎培養基體積的5%接種一級馴化菌株,在37℃厭氧箱內靜止培養30小時,作為二級馴化菌株;以此類推,以上一級馴化菌株為種子,接種量按基礎培養基體積的5%,進行逐級馴化,進行每一級馴化時,基礎培養基中的亞油酸添加量按基礎培養基體積的0.1%的劑量遞增,直至七級馴化,基礎培養基中的亞油酸添加量達0.7%,結束七級馴化后獲得七級馴化菌株;其中所述植物乳桿菌基礎培養基為:蛋白胨10.0g、牛肉提取物10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、無水乙酸鈉5.0g、檸檬酸三胺2.0g、Tween-801.0mL、磷酸氫二鉀2.0g、硫酸鎂0.02g、硫酸錳0.05g、蒸餾水1.0L,pH6.0~6.5,121℃滅菌20min;3)配置10%的脫脂奶乳濁液,向脫脂乳中加入2%的液態甘油、2%低聚木糖、2%葡萄糖,121℃滅菌20分鐘冷卻至37℃,分別按2%體積比例接種七級馴化菌株,37℃厭氧培養30--36小時,檢測生產發酵劑活菌數,活菌數≥1010個/ml,視同為發酵成熟,如果活菌數<1010個/ml,繼續培養,直至達到1010個/ml;4)將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中,液面高度低于1cm,加蓋瓶塞后放入-30℃冰柜速凍,凍結后將玻璃安瓶用托盤盛裝,放入凍干機進行冷凍干燥,制成發酵劑粉末凍干菌劑。?
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