本發明公開了具鞘微鞘藻的純化分離方法。在荒漠中取藻結皮，用PVC管取樣運回實驗室進行培養；取藻結皮在已滅菌培養皿中用無菌蒸餾水浸泡后，在體式顯微鏡下將具鞘微鞘藻藻體剝離并挑出，取出的藻體在顯微鏡下觀察鑒定，確定是具鞘微鞘藻后將其放入無菌培養皿中；將具鞘微鞘藻藻體經研磨、稀釋后，在體式顯微鏡下用巴斯德吸管將所觀察到的單根藻絲迅速吸出，在BG固體培養基中進行培養。培養2-3周后，在長出的具鞘微鞘藻藻落中用無菌鑷子取出在顯微鏡下鏡檢后，如無污染，即可轉移到已滅菌的BG液體培養基中。本發明解決了具鞘微鞘藻的純化分離問題，對應用于沙漠生物結皮和防風固沙提供可行的生物材料，具有廣闊的應用領域。

1.一種具鞘微鞘藻的純化分離方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：
(1)取樣：準備直徑是20cm，高10cm的PVC管，在荒漠環境中取發育
良好的藻結皮，用PVC管取樣，底部用鐵片和膠帶封住，運回實驗室；
(2)室內培養：將采集的藻結皮置于光照培養架上進行培養備用，培養
條件，光照強度36-54μmol·m^-2·s^-1，光照/黑暗時間是14h/10h；
(3)滅菌：將接種所用到的鑷子、解剖針、培養皿、研缽、載玻片、蓋玻
片、雙凹載玻片、巴斯德吸管和無菌蒸餾水一并滅菌，制備無菌BG₁₁固體培養
基并將其倒入固體培養皿；
(4)藻絲挑取：取藻結皮，先用無菌蒸餾水浸泡1h，然后將藻結皮放入已
滅菌培養皿中，加無菌蒸餾水使藻結皮能完全浸泡，將培養皿置于體式顯微鏡
下，用無菌尖頭鑷子和解剖針將一些具鞘微鞘藻藻體與藻結皮剝離并挑出，放
進另一個無菌培養皿中，并加5-10ml無菌蒸餾水；
(5)藻體鑒定：將取出的藻體放在載玻片上制成臨時裝片，在顯微鏡下
觀察鑒定，確定是具鞘微鞘藻后將其放入無菌培養皿中；
(6)研磨：將具鞘微鞘藻藻體轉移至滅菌的研缽中，加3-5ml無菌蒸餾水，
輕微研磨，將藻絲和膠鞘分離開來，形成均勻的藻液；
(7)接種：取1ml藻液，用無菌蒸餾水稀釋10倍，按照通常一滴為50μl
計，用移液器吸取一滴至已滅菌雙凹載玻片上，再加0.5ml無菌蒸餾水稀釋，
反復稀釋幾次，直至載玻片凹槽中含2-5根藻絲，然后取一滴至另一凹槽內，用
巴斯德吸管在酒精燈上燒熱拉成極細的針頭；將另一凹槽的藻液移至體式顯微
鏡的視野中，將顯微鏡調至最高倍，在視野中找到一根藻絲；然后將巴斯德吸
管裝上膠頭，把吸管的針頭移至視野中藻絲上方，將所觀察到的藻絲迅速吸出，
轉移到盛有BG₁₁固體培養基的平板中；其余稀釋的藻液可吸取0.5ml轉移至其
它固體培養基平板中；最后將培養皿用parafilm封口，在光照培養箱內培養，培
養條件：光照強度是50μmol·m^-2·s^-1，溫度為25℃，光照/黑暗時間是16h/8h；
(8)轉移培養基：培養2-3周后，在長出的具鞘微鞘藻藻落中用無菌鑷子
取出，制成臨時裝片，在顯微鏡下進一步觀察，無污染的藻類和細菌，即可轉
移到已滅菌的BG₁₁液體培養基中；如有污染，應重復上述步驟(6)、(7)，
進一步純化；
(9)所述的BG₁₁固體培養基，每升BG₁₁培養基組分含有：NaNO₃?1.5g，，
K₂HPO₄?0.04g，MgSO₄?0.07g，CaCl₂·2H₂O?0.036g，Citric?acid?0.006g，Ferric?
ammonium?citrate?0.006g，Na₂EDTA?0.001g，Na₂CO₃?0.02g，微量元素A₅溶液
1mL，瓊脂粉添加量為15g·L^-1，其中，A₅溶液組分：每升重蒸水中加入H₃BO₃
2.86g，MnCl₂·4H₂O?1.86g，ZnSO₄·7H₂O?0.22g，Na₂MoO₄·2H₂O?0.39g，CuSO₄·5H₂O
0.08g，Co(NO₃)₂·6H₂O?0.05g；
所述的BG₁₁液體培養基，每升BG₁₁培養基組分含有：NaNO₃1.5g，，K₂HPO₄
0.04g，MgSO₄?0.07g，CaCl₂·2H₂O?0.036g，Citric?acid?0.006g，Ferric?ammonium?
citrate?0.006g，Na₂EDTA?0.001g，Na₂CO₃?0.02g，微量元素A₅溶液1mL，其中，
A₅溶液組分：每升重蒸水中加入H₃BO₃?2.86g，MnCl₂·4H₂O?1.86g，ZnSO₄·7H₂O
0.22g，Na₂MoO₄·2H₂O?0.39g，CuSO₄·5H₂O?0.08g，Co(NO₃)₂·6H₂O?0.05g。