1.一種使醋桿菌種富集鈣的馴化培養方法，其特征在于：具體步驟如下：
（1）馴化初級菌液的制備
取500ml三角瓶，每瓶裝馴化培養液150ml；滅菌后在30±1℃和無菌條件
下，向每個三角瓶中接入醋桿菌0.1g，將三角瓶密封，放入回旋式搖床中培養，
轉速90－110rpm，溫度30±1℃，培養45小時結束即可獲得馴化初級菌液；其
中所述的馴化培養液為：
牛肉膏4g，碳酸鈣30g，磷酸二氫鈣25g，玉米粉10g，無水氯化鈣0.3g，
磷酸二氫鉀0.25g，玉米漿干粉5g，葡萄糖15g，加水1000ml后混合均勻既得；
所述的醋桿菌選自中科院微生物研究所提供的巴氏醋桿菌，編號為：Accc
10600或Accc10112；
（2）一級種子液的制備：
取250ml三角瓶，每瓶裝培養液100ml，滅菌后在30℃±1℃和無菌條件下，
每個三角瓶接入步驟（1）中獲得的馴化初級菌液10ml，將三角瓶密封，放入回
旋式搖床中培養，轉速每分鐘120-130轉，溫度30℃-32℃，培養25-30小時既
得一級種子液；其中所述的培養液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨5％，牛
肉膏5％，碳酸鈣3％，磷酸氫鈣2％，玉米粉2％，磷酸二氫鉀0.3％，玉米漿
干粉0.4％，葡萄糖2.3％，水80％；
（3）種子罐培養菌種液的獲得：
將種子罐培養液加入到已經滅菌的種子罐中，然后通入蒸氣加熱，利用夾層
蒸氣加熱到90℃-95℃時改用直接蒸氣加熱，當種子罐中蒸氣壓力達到
0.11-0.12兆帕時，保溫25-30分鐘即可達到滅菌效果；然后關閉蒸氣，待種子
罐降溫至28℃-30℃之間時，將步驟（2）中獲得的一級種子液按照種子罐培養
液重量1%的用量加入到種子罐中，然后蓋好接種帽，開始無菌空氣通風發酵，
無菌空氣用量為每100公斤培養液每分鐘用無菌空氣0.05-0.1立方，PH值自然，
轉速每分鐘120-130轉，發酵時間為25-30小時，檢測OD值應達到0.1毫升，
OD600mm=1即可停止發酵，獲得種子罐培養菌種液；
其中所述的種子罐培養液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨3％，牛肉膏
3.5％，葡萄糖0.5%，酵母膏3％，碳酸鈣2％，磷酸氫鈣1％，玉米粉1％，磷
酸二氫鉀0.2％，玉米漿干粉0.2％，水85.6%；
（4）發酵罐培養：
將發酵罐培養液加入到已經滅菌的發酵罐中，通入蒸氣加熱，當發酵罐中蒸
氣壓力達到0.11-0.12兆帕時，溫度121℃-122℃時，保溫30-35分鐘即可達到
滅菌效果；然后向夾層通入自來水降溫，當罐中溫度降到30℃-31℃時，無菌條
件下接入發酵罐培養液重量3%的步驟（3）中獲得的種子罐培養菌種液，接種時
首先提高種子罐的罐壓力，達到0.1兆帕，發酵罐罐壓維持在0.05兆帕，打開
接種管道的閥門將種子罐的菌種液直接輸送到發酵罐中去，輸送到上述定量的
菌液后關閉接種管道閥門開始發酵；發酵溫度30℃-31℃，轉速每分鐘150轉，
通風量每100公斤發酵液每分鐘通入無菌空氣0.1立方米，ph自然，發酵時間
25-30小時，檢測OD值應達到0.1毫升，OD600mm=1為合格，既得目標發酵菌
液；
其中所述的發酵罐培養液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨4％，牛肉膏
3％，酵母膏2.5％，葡萄糖3％，碳酸鈣5％，磷酸氫鈣3.5％，玉米粉3％，
磷酸二氫鉀0.3％，玉米漿干粉0.7％，乳酸鈉2％，水73％。
2.根據權利要求1所述的馴化培養方法，其特征是：所述步驟（1）中的滅
菌方法為：
將裝有馴化培養液的三角瓶口用八層紗布密封，放入醫用蒸汽消毒器中滅
菌，當蒸汽壓力達到0.05兆帕時，打開消毒器上的排氣閥門，當消毒器上的壓
力表歸零時，關閉排氣閥，繼續加溫，當消毒器中的蒸汽壓力達到0.11兆帕時，
保持30分鐘，然后將消毒器離開加熱源讓其自然降溫，當消毒器上的壓力表指
向零時，滅菌完成。
3.根據權利要求1所述的馴化培養方法，其特征是：所述步驟（2）中一級
種子液的制備中的滅菌方法為：
將裝有培養液的三角瓶瓶口密封，放入高壓消毒器蒸氣滅菌；當蒸氣壓力達
到0.05兆帕時，打開消毒器上的排氣閥排氣，當消毒器上的壓力表歸零時，關
閉排氣閥，繼續加溫，當消毒器中的蒸氣壓力達到0.11兆帕時保持25分鐘；
然后將消毒器離開加熱源讓其自然降溫，當消毒器上的壓力表指向零時滅菌完
成。
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