本發(fā)明是一種磁性納米復合系統(tǒng)的制備方法，該方法是分別制備質粒pHRE-Egr-1-EGFP和PEI-MnZnFeO納米磁粒，再按PEI-MZF-NPs與pEgr1-HSV-TK質量比為40：1，將質粒pEgr1-HSV-TK和PEI-MZF-NPs分別用無血清培養(yǎng)基稀釋，室溫放置5分鐘后，將二者混和到一起并混勻，置室溫下孵育30分鐘，即獲得pEgr1-HSV-TK/PEI-MZF-NPs復合物。本發(fā)明制得的復合物轉染肝癌Bel-7402細胞，獲得了較高的轉染效率，細胞毒性甚微，顯示了比電穿孔轉染法和脂質體轉染法明顯的優(yōu)越性。

1.一種納米磁粒復合系統(tǒng)的制備方法，包括下述步驟：（1）質粒pHRE-Egr-1-EGFP的制備：將Egr1啟動子置于pIRES載體上，其前有一CMV增強子片段，用以增強Egr1啟動子表達效率，以CMVE-Egr1p序列為模板設計引物，PCR擴增CMVE+Egr1p片段，回收CMVE-Egr1p片段，以MluI+NheI為亞克隆位點，將其亞克隆至pCDNA3.1-EGFP上，構建pCDNA3.1-Egr1-EGFP質粒；轉化后，挑取若干個克隆，提取質粒，進行PCR鑒定；根據PCR電泳結果，選擇正確的pCDNA3.1-Egr1-EGFP進行測序比對；合成5HRE，并在合成5HRE片段時，兩側各加若干個酶切位點，將其插入pUC57載體上，獲得pUC57-5HRE，將合成產物酶切鑒定、基因測序；將pUC57-5HRE和pCDNA3.1-Egr1p-EGFP分別用MluI酶切連接，將連接產物轉化至DH5α中，挑取克隆進行BglII酶切鑒定，選擇正確的克隆進行測序，將測序序列與欲獲得的5HRE序列進行比對；（2）PEI-Mn_0.5Zn_0.5Fe₂O₄納米磁粒的制備：按Mn：Zn：Fe的摩爾比為0.5:0.5:2稱取原料MnSO₄·H₂O、ZnSO₄·7H₂O、FeSO₄·7H₂O，混合后倒入高速研磨杯磨成粉狀，按n(M)∶n(OH^–)=1∶2.4，其中M代表所有金屬離子，稱取所需NaOH的量，加適量水溶解，將粉末倒入其中并混勻，不斷攪拌成糊狀，室溫放置12h后，80℃干燥，得到粉末狀前驅體，放入馬弗爐中400℃焙燒1h,?自然冷卻后熱蒸餾水浸洗，過濾，用BaCl₂檢測濾液中無白色沉淀后，無水乙醇淋洗一遍，60℃烘干，即得Mn_0.5Zn_0.5Fe₂O₄納米磁粒；稱取一定量的Mn_0.5Zn_0.5Fe₂O₄納米磁粒溶于去離子水中，配制成質量百分比為4%的磁流體，超聲分散后高速離心棄上清；沉淀重懸于PBS緩沖液中，超聲分散后按照PEI與MZF-NPs質量比為1：5的量緩慢加入PEI，充分混勻，恒溫搖床24h使反應充分；用磁分離法將磁性粒子從溶液中分離，經蒸餾水、甲醇反復洗滌，真空干燥后即獲得表面修飾過的Mn_0.5Zn_0.5Fe₂O₄納米磁粒；（3）復合物制備：按PEI-MZF-NPs與pHRE-Egr-1-EGFP質量比為40：1，將質粒pHRE-Egr-1-EGFP和PEI-?MZF-NPs分別用無血清培養(yǎng)基稀釋，室溫放置5分鐘后，將二者混和到一起并混勻，置室溫下孵育30分鐘，即獲得pHRE-Egr-1-EGFP/PEI-?MZF-NPs復合物。