1.一種檢測生物素的高效薄層掃描分析方法,其特征在于:步驟如下:
(1)取待檢測樣品液4μL,點在涂有硅膠GF254高效薄層板上,以體積比二氯甲烷:異
丙醇:甲醇:冰乙酸=1~3:1~3:2~3:0.01~0.15作為展開劑,在展開缸內展開,展
距為6cm,并采用外標一點法點1μL生物素標準品溶液,同時展開,展開的時間為40分鐘,
展開的距離為6cm,然后晾干;
(2)將2,4-二甲氨基肉桂醛、濃硫酸和無水乙醇混合,配成染色液,其中2,4-二甲氨基
肉桂醛終濃度為0.1~0.2%,硫酸終濃度為10~20%;展完后晾干的展板,用染色液噴霧染色,
將板放進通風櫥5分鐘后,噴上10%的石蠟氯仿溶液;冷卻后放入Camag薄層掃描儀-Ⅲ掃描,
掃描波長為530nm,通過檢測樣品和標準品對紫外線的吸光度并計算得到生物素的含量;
步驟(1)中,生物素標準品溶液的濃度分別為0.19mg/mL、0.3mg/mL、0.66mg/mL、1.28mg/mL
和3.31mg/mL;
所述樣品液是通過以下方法制備得到的:
(1)取1公斤冷凍的南極磷蝦,在40~60℃烘干,然后加入3~9升的氯仿,在常溫下
攪拌提取1~3次,每次時間為30~60分鐘,過濾得處理蝦粉;
(2)將上述得到的處理蝦粉按蝦粉:二甲基甲酰胺=1g:25~40mL的比例加入二甲基甲
酰胺,在75~95℃水浴上攪拌提取1~2小時,得提取液;
(3)上述得到的提取液在10,000rpm下離心10分鐘,取上清液,向上清液中加入等體
積量的乙醇,50~65℃下旋轉蒸發濃縮,得濃縮液,即為含有生物素的樣品液。
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