一種可替代魚粉的菌糠蛋白肽及其制備方法和在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用，屬于微生物和水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以食用菌菌糠廢料為基礎(chǔ)原料，首先采用先靈芝菌，后釀酒酵母的分步固體發(fā)酵技術(shù)，將食用菌菌糠的原始營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分轉(zhuǎn)化為高品質(zhì)的菌體蛋白和多糖類；然后采用纖維素酶、食用菌水解酶和酵母抽提酶相結(jié)合的酶解技術(shù)，使蛋白質(zhì)充分釋放并水解為短分子量的小肽；最后經(jīng)濃縮、干燥，獲得富含易消化小肽，并具有較強(qiáng)DPPH自由基清除能力的菌糠蛋白肽產(chǎn)品。本發(fā)明具有菌糠利用率高、產(chǎn)品得率高、操作簡(jiǎn)單，實(shí)用性強(qiáng)，便于推廣的優(yōu)點(diǎn)；用于水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料，可部分替代魚粉，起到促進(jìn)水生動(dòng)物生長(zhǎng)、提高飼料利用率的作用。

1.一種可替代魚粉的菌糠蛋白肽的制備方法，其特征在于以食用菌菌糠廢料為基礎(chǔ)原
料，首先采用先靈芝菌、后釀酒酵母的分步固體發(fā)酵技術(shù)，將食用菌菌糠的原始營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充
分轉(zhuǎn)化為高品質(zhì)的菌體蛋白和多糖類；然后采用纖維素酶、食用菌水解酶AO₂和酵母抽提酶
相結(jié)合的酶解技術(shù)，使蛋白質(zhì)充分釋放并水解為短分子量的小肽；最后經(jīng)濃縮、干燥，獲得
富含易消化小肽，即可替代魚粉的菌糠蛋白肽；其制備步驟如下：
（1）菌糠的預(yù)處理
將塊狀食用菌菌糠打碎，并除去肉眼可見的雜質(zhì)后，轉(zhuǎn)移至烘箱，50℃干燥至含水量低
于5%，粉碎，過40目篩，備用；
（2）菌糠的發(fā)酵
所采用的菌糠發(fā)酵工藝是以食用菌菌糠廢料為基礎(chǔ)原料，先接種靈芝菌，發(fā)酵長(zhǎng)滿菌
絲后再接種釀酒酵母的混菌固體分步發(fā)酵技術(shù)；
①菌體活化
靈芝菌種劃線接種于PDA斜面培養(yǎng)基，PDA斜面培養(yǎng)基組成以g/L計(jì)為：葡萄糖20、瓊脂
20，用土豆汁配制，pH自然；28℃培養(yǎng)7天后，觀察其生長(zhǎng)情況，長(zhǎng)勢(shì)良好即為成熟，準(zhǔn)備移
種；
土豆汁制備方法為：土豆200g，去皮，切成小塊，加入1L去離子水煮沸30min，過濾，所得
濾液用去離子水定容至1L；
釀酒酵母劃線接種于麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)2天后，觀察其生長(zhǎng)情況，長(zhǎng)勢(shì)良好
即為成熟，準(zhǔn)備移種；
所使用的靈芝菌和釀酒酵母，均為農(nóng)業(yè)和食品領(lǐng)域常用的生產(chǎn)菌種，通過商業(yè)途徑或
國(guó)家指定機(jī)構(gòu)購(gòu)買；
所使用的麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基從市售途徑購(gòu)買；
②種子培養(yǎng)液制備
用接種鏟從斜面上挑取大1cm×1cm的靈芝菌塊，接入經(jīng)滅菌的靈芝菌液體培養(yǎng)基中，
140r/min旋轉(zhuǎn)式搖床，28℃培養(yǎng)7天；
靈芝菌液體培養(yǎng)基組成以g/L計(jì)為：豆餅粉20、玉米粉20、葡萄糖20、K₂HPO₄ 1、MgSO₄
0.5、V_B 0.12，用自來水配制，pH自然；
用接種環(huán)從斜面上挑取一環(huán)成熟的釀酒酵母菌體，接入經(jīng)滅菌的麥芽汁液體培養(yǎng)基
中，150r/min旋轉(zhuǎn)式搖床，28℃培養(yǎng)2天；
所使用的麥芽汁液體培養(yǎng)基從市售途徑購(gòu)買麥芽汁培養(yǎng)基粉末后，用自來水配制，pH
自然；
③分步發(fā)酵
將靈芝菌種子培養(yǎng)液以體積比5%的接種量接入已滅菌的菌糠固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃
靜置培養(yǎng)7天；然后，以10⁸個(gè)/g的接種量接入釀酒酵母種子培養(yǎng)液，28℃培養(yǎng)4天；
菌糠固體發(fā)酵培養(yǎng)基組成以g/kg計(jì)為：菌糠880，麩皮100，尿素20，料水重量比1︰1.8，
pH自然；
（3）菌糠的酶水解
將發(fā)酵結(jié)束后的固體培養(yǎng)物置于烘箱中50℃烘干，粉碎，水洗除雜；
按料水重量比1︰5加水，調(diào)節(jié)pH至4.8，以烘干固體培養(yǎng)物的重量百分比，加入纖維素酶
0.7%，50℃酶解1h；接著調(diào)節(jié)pH至6.5，以烘干固體培養(yǎng)物的重量百分比，加入食用菌水解酶
AO₂ 0.5%、酵母抽提酶1%，55℃酶解4h；酶水解結(jié)束后，升溫至85℃，滅酶10min；
（4）菌糠蛋白肽的提取
將滅酶后的水解液，4000r/min離心15 min，收集上清液減壓濃縮至1/4體積，噴霧干燥
得到菌糠蛋白肽粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可替代魚粉的菌糠蛋白肽的制備方法，其特征在于步驟（1）所
述的菌糠，包括香菇、猴頭菇、雞腿菇、茶樹菇、杏鮑菇、木耳、靈芝、姬松茸、或灰樹花食藥用
菌，采摘完子實(shí)體后剩余的固體廢料。
3.用權(quán)利要求1所述方法制備的可替代魚粉的菌糠蛋白肽，其特征在于所述菌糠蛋白
肽是以食用菌菌糠廢料為基礎(chǔ)原料，接種靈芝菌和釀酒酵母分步發(fā)酵，再經(jīng)溫和酶解、噴霧
干燥后，制成的粉末狀產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的可替代魚粉的菌糠蛋白肽，其特征在于所述菌糠蛋白肽是以
食用菌菌絲體蛋白和酵母微生物蛋白為基礎(chǔ)蛋白源，經(jīng)酶解法生產(chǎn)的，主要成分為短肽的
粉末狀產(chǎn)品，其相對(duì)分子質(zhì)量≤2000的肽段占產(chǎn)品干重的≥60％，并具有較高的清除DPPH
自由基的抗氧化能力。
5.用權(quán)利要求1所述方法制備的可替代魚粉的菌糠蛋白肽的應(yīng)用，其特征在于部分替
代水生動(dòng)物飼料中的主要蛋白原料——魚粉，加入量為飼料干重的1.6%-8%，替代16%-80%
的魚粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述可替代魚粉的菌糠蛋白肽的應(yīng)用，其特征在于所述水生動(dòng)物包
括甲魚、蝦、蟹甲殼類水生動(dòng)物和其它各種淡水魚、海水魚。