本發明公開了一種海洋微生物來源的低溫偏甘油酯脂肪酶及其應用，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO:2所示。編碼上述偏甘油酯脂肪酶的基因序列如SEQID？NO:1所示。本發明獲得中性脂肪酶，在pH7.0具有最適酶活性，其對橄欖油的水解反應中，最適溫度為40℃；對大豆卵磷脂為底物的水解反應中，最適反應溫度為30℃。MAJ1對茶油的水解反應表明其是一個1,3位選擇性的偏甘油酯脂肪酶。同時該脂肪酶在20℃～30℃處理3小時仍然具有大于95％的酶相對剩余活性，可以應用于去除油脂中偏甘油酯。

1.一種海洋微生物來源的低溫偏甘油酯脂肪酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID
NO:2所示。
2.一種偏甘油酯脂肪酶基因，其特征在于，基因序列如SEQIDNO:1所示。
3.包含權利要求2所述基因的表達載體。
4.一種細胞，其特征在于，包含權利要求3所述的載體，或其基因組中整合有權利要求2
所述的脂肪酶基因。
5.一種偏甘油酯脂肪酶重組菌株的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)制備偏甘油酯脂肪酶表達質粒：
a.人工合成權利要求2的基因序列；
b.將上述擴增基因PCR產物經DNA純化后，限制性內切酶KpnI和SalI分別對純化的基
因片段和質粒pGAPZαA進行雙酶切消化，連接，轉化至大腸桿菌E.coliDH5α感受態細胞，得
到脂肪酶表達質粒；
(2)利用表達質粒制備重組菌株：
a.將步驟(1)的脂肪酶表達質粒經限制性內切酶BlnI線性化后，電轉至宿主細胞；
b.將轉化液涂布于含有100mg/mlZeocin的YPD平板中，30℃培養3天后，平板上長出酵
母單菌落為重組菌株。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述PCR的引物序列如下：
MAJ1For5’-TACTGGTACCGCCACCGTCGCTGCTGATCCC-3’
MAJ1Rev5’-AGCTCTCGAGTCAGTGATGGTGGTGATGGTG-3’。
7.根據權利要求5或6所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述宿主細胞為巴斯德畢
赤酵母(Pichiapastoris)X-33。
8.權利要求5或6或7所述的方法制備的重組菌株。
9.權利要求1所述脂肪酶的應用，其特征在于，該脂肪酶用于催化甘油酯的水解或合成
甘油二酯，或用于植物油精煉過程中的酶法脫膠。
10.一種生產權利要求1所述的脂肪酶的方法，其特征在于，包括：培養權利要求4所述
的細胞，從培養物中分離出表達產物。