一種檢測磷酸化蛋白的熒光探針系統及探針合成方法與應用。該探針系統包括以下探針1、探針2或探針3中的一種或二種或三種：該探針通過Zn配合物作為受體結合磷酸根離子，從而將兩個芘熒光團拉近形成激基復合物，實現熒光的比率變化。探針合成方法簡單、產率高，與焦磷酸根離子結合能力強，能識別多磷酸化蛋白。與現有磷酸化蛋白探針相比，該探針不僅能夠實現對磷酸化蛋白的特異性識別，而且能夠區分磷酸化蛋白磷酸化位點的距離遠近，并且能夠跟蹤蛋白的磷酸化過程及去磷酸化過程，在生物及醫學領域有極其重要的應用價值。

1.一種檢測磷酸化蛋白的熒光探針系統，其特征在于：包括探針1、探針2或探針3中的
一種或二種或三種，熒光探針的結構如下：

2.一種權利要求1所述的檢測磷酸化蛋白的熒光探針系統中熒光探針3的合成方法：
步驟如下：
(1)1-(3-溴丙基)芘的合成
溴取代芘在無水無氧條件下加入無水乙醚溶解，在冰浴條件下注入n-BuLi，攪拌0.5-
2h后，滴入1,3-二溴丙烷，冰浴下繼續攪拌0.5-2h后，升溫至室溫攪拌過夜，即可得到1-(3-
溴丙基)芘；
(2)3-(芘基-1)-N,N-2-吡啶基亞甲基正丙氨的合成
第一步產物與KI在氮氣保護條件下，用DIPEA溶解，將DPA(雙-(吡啶基-2-亞甲基)胺)
溶于無水乙腈中，再加入到反應器中，升溫至80-90℃，攪拌回流，反應12-48h即可得到3-
(芘基-1)-N,N-2-吡啶基亞甲基正丙氨；
(3)探針3的合成
用體積比CHCl₃/CH₃CN＝20:1～1:1的CHCl₃/CH₃CN溶液溶解第二步產物，將用甲醇助溶
的ZnClO₄·6H₂O加入反應器中，在室溫條件下攪拌0.5-2小時后，將乙醚加入，攪拌過夜后析
出探針3。
3.按照權利要求2所述探針3的合成方法，其特征在于：步驟(1)中溴取代芘與無水乙醚
的質量/體積比為1:50-70(g/mL)，溴取代芘與n-BuLi的質量/體積比為1：1.6-2(g/mL),溴
取代芘與1,3-二溴丙烷的質量/體積比為1:1.6-2(g/mL)。
4.按照權利要求2所述探針3的合成方法，其特征在于：步驟(2)中第一步產物與KI的摩
爾比為1：0.5-0.7，第一步產物與DIPEA的質量/體積比為1：9-11(g/mL),第一步產物與DPA
的質量/體積比為1：0.4-0.6(g/mL),第一步產物與無水乙腈的質量/體積比為1：0.2-0.4
(g/L)。
5.按照權利要求2所述探針3的合成方法，其特征在于：步驟(3)中第二步產物與CHCl₃/
CH₃CN混合溶液的質量/體積比為1：50-70(g/mL),第二步產物與ZnClO₄·6H₂O的摩爾比為1：
0.5-2，第二步產物與乙醚的質量/體積比為1：1-2(g/mL)。
6.一種權利要求1所述的檢測磷酸化蛋白的熒光探針系統在檢測磷酸化蛋白、檢測磷
酸化蛋白磷酸化位點的距離或檢測蛋白磷酸化過程和磷酸化蛋白去磷酸化過程中的應用。
7.按照權利要求6所述應用，其特征在于：該磷酸化蛋白的熒光探針系統能區分磷酸化
位點不同間距的磷酸化蛋白，先利用探針1或2與磷酸化蛋白作用，再利用探針3與該磷酸化
蛋白作用，若探針1或2、探針3均有響應，則為臨位磷酸化蛋白；若探針1或探針2無響應或不
強、探針3有強響應，則為磷酸化位點間隔一定距離的磷酸化蛋白。