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一種DNA熒光探針及其制備方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-26
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200810154242.0 
  • 技術(專利)名稱 一種DNA熒光探針及其制備方法 
  • 項目單位 天津工業大學
  • 發明人 張紀梅,許世超,代昭 
  • 行業類別 智慧健康-物聯網
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 尤開田
  • 發布時間 2021-07-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種DNA熒光探針及其制備方法。該探針的特征在于它采用半導體發光納米粒子CdTe/CdS/ZnS做發射熒光的能量給體,金納米粒子做吸收熒光的能量受體,所述CdTe/CdS/ZnS納米粒子與單鏈NH-DNA相連接,構成CdTe/CdS/ZnS-DNA;所述金納米粒子與單鏈SH-DNA相連接,構成Au-DNA;所述單鏈SH-DNA與NH-DNA互補,使所述CdTe/CdS/ZnS-DNA與Au-DNA雜交制成。該制備方法首先制備半導體發光納米粒子CdTe/CdS/ZnS及CdTe/CdS/ZnS-DNA;其次制備金納米粒子及Au-DNA納米粒子;最后連接所述CdTe/CdS/ZnS-DNA(能量給體)和Au-DNA(能量受體),制得DNA熒光探針。
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  • 02

    說明書

    1.一種DNA熒光探針,其特征在于該探針采用半導體發光納米粒子CdTe/CdS/ZnS做發射熒光的能量給體,金納米粒子做吸收熒光的能量受體,所述CdTe/CdS/ZnS納米粒子與單鏈NH2-DNA相連接,構成CdTe/CdS/ZnS-DNA;所述金納米粒子與單鏈SH-DNA相連接,構成Au-DNA;并且所述單鏈SH-DNA與NH2-DNA互補,使所述CdTe/CdS/ZnS-DNA與Au-DNA雜交制成。2.根據權利要求1所述的DNA熒光探針,其特征在于所述互補的單鏈DNA序列根據A-T,G-C對應的原則得出;所述DNA鏈段選自下述DNA編碼序列:具有沙門氏桿菌特征的DNA編碼序列:5’-CTGATGCCTCCCTGCCCCACCAGTATTCGCTGATGGCCGGCAGGGAGTG?CCAG-3’;具有志賀氏桿菌特征的DNA編碼序列:5’-ATGAAGAAAGGTGATGCGGCTGAACATGCAGAGCACCATATGAAAGACAACGCTGGGTTCCAGGCTGGATGTGTGCTCCACATCCACAGCAGATGCCACTGAACGCACCGATAACCTGGCTGATGCCG?CCTGA-3’;具有鼠疫桿菌特征的DNA編碼序列:5’-GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAD-3’或5’-AGTAAGCAAGAGAGAGCCGGGGGG-3’;具有弓形蟲特征的DNA編碼序列:5’-ATGGCGGGTATCTTTCGCACGATCTATGACTGGCTCCTGAGATGTTCTG-3’、5’-GCAGGGC?GACAGAGATGGATGTCACCATGATTGGTCTCCAGAATGCAGGAAAGTCTTCGTTGTTGCGCGTGCTTGCGGTA-3’或5’-CAGAACTCAAGTGGCATAGATGTGGAAGAAAAGAGTCTCTTCTTGGATATCTGGAGGAACTGGCAAAAGG-3’;具有肝炎病毒特征的DNA編碼序列:5’-ATTAGAATGAAGAATCCCTCCATTGTTGGAGTCCTGTGCAAGATTCACAAGGACTTAATCTGGGTTGTA-3’或5’-ATAATGCATCCTCAAGTGGTCATCTTAAGCCTCATCCTACATCTGGCA?G-3’;具有冠狀病毒特征的DNA編碼序列:5’-AGGTGATGACGAATTTATTGAGTAA-3’或5’-ATGATTCAAACTCCAACATCTTTTCTAATAGTGTTAATTCTTCTTTGGTTTAAACTTGTGTTAAGTTGTTTTAAAGAGTGTGTTTTAGCGCTTCTTCAATTAATACAAGTTTTACTCCAAATTATTAATAGTAACTTACAGGCTAGACTT?CTGCTTTGGC?ACAGTCTAGA?CTAA-3’;具有肺炎球菌特征的DNA編碼序列:5’-ATGTGTCCTCAGAAGCTAACCATCTCCTGGTTTGCCATCGTTTTGCTGGT?GTCTCCACTCATGGCCATGT?GGGAGCTGGA?GAAAGACG-3’、5’-AATACTTGTACCAGTGTTTACACAAAAGATAGAACTGCTAGTGTAAAAT?TCCAGCCTTAGACCTTCTGATTAAG-3’或5’-ATTGAGATGA?AGCGATATGC?TGTGCCCTTA?G-3’;具有流感病毒特征的DNA編碼序列:5’-ATGAAGAAAATGAATCACAAGTCAACTGACAGTCCAAAGGCTCCACAGCTCAGAGGAGGG-3’或5’-ATGAAACGCATTAGCACCACCATTACCACCACCATCACCATACCACAGG?TAACGGTGCGGGCTGA-3’。3.一種權利要求1或2所述DNA熒光探針的制備方法,該制備方法采用以下工藝:首先,制備CdTe/CdS/ZnS-DNA溶液;具體方法為:(1)制備半導體發光納米粒子CdTe/CdS/ZnS原液,其包括:將Te粉和NaBH4置于比色管中,并在20-100℃下反應,制備得NaHTe即備用溶液A;制備pH5-12并且含有巰基有機酸和氯化鎘的混合溶液,劇烈攪拌下迅速加入Na2S溶液,用N2氣脫氧,得備用溶液B;制備pH6.0-9.0并且含有巰基有機酸和硫酸鋅的混合溶液,用N2氣脫氧,得備用溶液C;制備pH6.0-9.0并且含有巰基有機酸和氯化鎘的混合溶液,用N2氣脫氧,得備用溶液D;在所述D溶液中迅速加入A溶液和極少量Na2S溶液并攪拌,在未形成CdTe晶之前,加入所述B溶液并攪拌,得到CdTe/CdS前驅體溶液;在前驅體溶液中加入所述C溶液,回流1-24h,得到發射紅色熒光的半導體發光納米粒子CdTe/CdS/ZnS原液;其中,所述的含有巰基有機酸為巰基乙酸或者巰基丙酸,所述氯化鎘和硫酸鋅的摩爾濃度均為:(0.25-10.0)×10-3M;所述A溶液中的NaHTe、B溶液中的Na2S、C溶液中的硫酸鋅、D溶液中的氯化鎘的摩爾濃度比例為(0.1-1.5)∶(0.01-0.5)∶(1.0-3.0)∶(0.01-0.2);(2)制備CdTe/CdS/ZnS-DNA溶液:將1-10ml的CdTe/CdS/ZnS原液和1OD的3’-NH2-DNA混合,加入3’-NH2-DNA量1-40倍的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞氨鹽酸鹽,在Tris-HCl溶液中反應0.1-72h,即得到能夠發出紅色熒光的CdTe/CdS/ZnS-DNA溶液;其次,按常規方法制備Au-DNA溶液;最后,制備DNA熒光探針;將所述CdTe/CdS/ZnS-DNA溶液與Au-DNA溶液按1∶(0.1-20)的體積比混合,加入1-200ml雜交緩沖液磷酸鹽溶液,在10-90℃下雜交0.5-24小時,即得到DNA熒光探針。4.根據權利要求3所述DNA熒光探針的制備方法,其特征在于通過在DNA序列與CdTe/CdS/ZnS相連的一端加入1-10個堿基,改變所述CdTe/CdS/ZnS-DNA上所連接的單鏈DNA序列的長度,調節所述CdTe/CdS/ZnS納米粒子和金納米粒子之間的距離,得到不同強度的熒光;所述的堿基可以是A、T、G和C中的任意一個或者一個以上的任意組合。
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專利技術附圖

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