1.用于檢測小鼠呼腸孤病毒III型的引物和與所述引物配合使用的
探針的組合，其特征在于，所述引物是由序列表中的SEQ?ID?NO:1所示
的上游引物與序列表中的SEQ?ID?NO:2所示的下游引物組成的一對寡核
苷酸；所述探針為序列表中的SEQ?ID?NO:3所示的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的組合，其特征在于，所述探針5’端連接有
熒光報告基團，3’端連接有熒光淬滅基團。
3.根據權利要求2所述的組合，其特征在于，所述熒光報告基團選
自FAM、VIC、JOE、HEX中的任意一種，所述熒光淬滅基團選自TAMRA
或Eclipse。
4.根據權利要求2所述的組合，其特征在于，所述熒光報告基團為
FAM，所述熒光淬滅基團為TAMRA。
5.一種用于檢測鼠源生物制品中呼腸孤病毒III型殘留的方法，其
特征在于，所述方法使用權利要求1至4中任一所述的用于檢測小鼠呼
腸孤病毒III型的引物和與所述引物配合使用的探針的組合進行實時熒光
定量PCR檢測。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR
的反應體系還包括RT-PCR擴增試劑、陽性RNA標準品、酵母tRNA稀
釋液、陰性質控品、空白對照。
7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定
量PCR的退火溫度為60℃。
8.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定
量PCR的反應條件為：48℃，15min；95℃，10min；95℃，15sec，60℃，
40sec，共40個循環。
9.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述方法還包括
標準曲線的建立，方法為：擴增含序列表中SEQ?ID?NO:4所示的堿基同
源序列的pMD18-T載體，得到190bp的DNA片段，體外轉錄所述DNA
片段并純化獲得的RNA作為陽性RNA標準品，將其十倍稀釋成不同濃
度的陽性定量標準品，以所述陽性定量標準品作為模板進行實時熒光定
量PCR檢測，得到檢測小鼠呼腸孤病毒III型的標準曲線。
10.一種檢測小鼠呼腸孤病毒III型的試劑盒，其特征在于，所述試
劑盒含有權利要求1至4中任一所述的用于檢測小鼠呼腸孤病毒III型的
引物和與所述引物配合使用的探針的組合。
11.根據權利要求10所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反
應體系還包括RT-PCR擴增試劑、陽性RNA標準品、酵母tRNA稀釋液、
陰性質控品、空白對照。
12.根據權利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR擴
增試劑為2×Taqman?PCR?Mix、40×Taqman?RT-Enzyme?MIX。
13.根據權利要求11或12所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性
RNA標準品通過下述方法獲得：擴增含序列表中SEQ?ID?NO:4所示的堿
基同源序列的pMD18-T載體，得到190bp的DNA片段，體外轉錄所述
DNA片段并純化獲得的RNA即標準品。
14.權利要求1至4中任一所述的用于檢測小鼠呼腸孤病毒III型的
引物和與所述引物配合使用的探針的組合在檢測鼠源生物制品中呼腸孤
病毒III型殘留時的應用。
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