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基于DNA自組裝的非酶SNP檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-26
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310145787.6 
  • 技術(專利)名稱 基于DNA自組裝的非酶SNP檢測方法 
  • 項目單位 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
  • 發明人 曾令文,吳薇,陳俊華 
  • 行業類別 智慧健康-物聯網
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王韻清
  • 發布時間 2021-10-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了基于DNA自組裝的非酶SNP檢測方法,包括如下步驟:設計分離捕獲探針CP、單鏈MP、探針AP1和AP2;將CP、MP、核酸連接酶和樣本加入反應液中,混勻,反應完全;將反應液中生成的雙鏈DNA解鏈為單鏈DNA;將連接有分離標記的單鏈DNA分離,清洗去除其他游離DNA鏈;將清洗后的帶分離標記的單鏈DNA、AP1、AP2加入反應液,反應完全以形成自組裝雙鏈;將連接有分離標記的DNA鏈分離,清洗去除其他游離DNA鏈;通過檢測清洗后的DNA鏈中雙鏈DNA的量,確定SNP的量。本方法具有靈敏度高、特異性好、操作簡單用時短,對樣本要求低等優點。
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  • 02

    說明書

    1.基于DNA自組裝的非酶檢測SNP?的方法,包括如下步驟:1)設計分離捕獲探針CP、單鏈MP、探針AP1和AP2,其中:CP和MP可分別和目標序列的5’端和3’端互補為雙鏈,在形成的雙鏈中,CP和MP之間存在單鏈缺刻,該單鏈缺刻左側或右側的核苷酸與目標序列的SNP位點互補;CP的一個末端連接有分離標記;自組裝AP1的5’端和3’端可分別和AP2的3’端和5’端互補,自組裝形成雙鏈DNA,AP1和AP2的5’端和3’端中至少部分序列可與MP的一端互補為雙鏈;2)將CP、MP、核酸連接酶和樣本加入反應液中,混勻,反應完全;3)將反應液中生成的雙鏈DNA解鏈為單鏈DNA;4)將連接有分離標記的單鏈DNA分離,清洗去除其他游離DNA鏈;5)將清洗后的帶分離標記的單鏈DNA、AP1、AP2加入反應液,反應完全以形成自組裝雙鏈;6)將連接有分離標記的DNA鏈分離,清洗去除其他游離DNA鏈;7)通過檢測清洗后的DNA鏈中雙鏈DNA的量,確定SNP的量。2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:CP和MP的長度獨立為15~30bp。3.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于:AP1和和AP2的長度獨立為20~50?bp。4.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于:分離標記為親合基團、固相載體。5.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于:核酸連接酶選自?T4?DNA連接酶、E.coli?DNA連接酶、Tsc?DNA連接酶。6.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于:將清洗后的DNA鏈與特異性嵌入雙鏈DNA中的熒光染料反應,之后檢測其熒光值確定雙鏈DNA的量。7.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于:通過加熱之后急冷將雙鏈DNA解鏈為單鏈DNA。8.實現權利要求1~7任意一項權利要求所述方法的檢測試劑盒。
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專利技術附圖

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