1.一種測定蛋白穩(wěn)定性的方法，其特征在于，具體步驟如下：
(1)將待測蛋白與帶化學(xué)反應(yīng)活潑基團的熒光試劑進行反應(yīng)形成化學(xué)鍵，制備攜帶熒
光探針的蛋白樣品；
(2)對攜帶熒光探針的蛋白樣品進行變性處理，先增高至設(shè)定的變性強度值，然后降低
變性強度，記錄不同變性強度下測得的熒光值，繪制熒光值隨變性強度變化的曲線，形成熒
光值隨變性強度增加和降低的軌跡；
(3)通過分析熒光值隨變性強度增加和降低的軌跡是否重疊，分析待測蛋白是否發(fā)生
不可逆失活；其重疊時的最大變性強度值為待測蛋白發(fā)生不可逆失活的變性強度值；
步驟(3)中，采用參數(shù)Di分析熒光值隨變性強度增加和降低的軌跡是否重疊，當Di值大
于等于基線標準偏差的3倍表示變性強度增加和降低的熒光值軌跡開始不重疊；其計算公
式如下所示：
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其中：
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Fh,Fl,y分別表示變性強度升高過程中某變性強度時的熒光值，變性強度降低過程中
對應(yīng)于變性強度升高過程中相同變性強度的熒光值，一次升降變性強度處理中升高及降低
在對應(yīng)變性強度下熒光強度比值所構(gòu)成的數(shù)組。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，所述熒光試劑的熒光基團選自
熒光素，香豆素，羅丹明，魯米諾，派洛寧，尼羅紅，酚紅，鈣黃綠素，耐爾藍，臺盼藍，甲酚紫
或溴化乙啶，及其衍生物中任一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，熒光試劑的化學(xué)反應(yīng)活潑基團
選自異硫氰酸，磺酰氯，琥珀酰亞胺酯，磺基琥珀酰亞胺酯，乙酰甲酯，醛基，羧基，胺基或巰
基中任一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述變性處理選自加熱，加壓，
加鹽，加剪切力，改變pH，加去污劑處理中任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述變性強度為溫度、壓強、鹽度，剪切力，
pH，去污劑中任一種。
